Karbonhidrat Fermantasyon Testi Karbonhidratları Fermente Yeteneklerini Bulmak İçin Bakteriler Üzerinde Test

Karbonhidrat Fermantasyonu Karbonhidratları Fermente Yeteneklerini Bulmak İçin Bakteriler Üzerinde Test!

Prensip:

Bazı bakteriler karbonhidratları, özellikle de şekerleri mayalama yeteneğine sahiptir. Bunlar arasında, her bakteri şekerlerin sadece bazılarını mayalayabilir, diğerlerini ise mayalayamaz.

Böylece, bir bakterinin fermente edebileceği şekerler ve yapamayacağı şekerler, bakterilerin özelliğidir.

Karbonhidrat fermantasyon testi, bakterilerin, glikoz, sukroz, laktoz, maltoz ve ksiloz gibi şekerlerin yanı sıra aesculin, salisin, adonitol, dulcitol ve sorbitol gibi alkollü türevlerini fermente etme kabiliyetini test etmek için gerçekleştirilir. Bakteriler bir şeker veya şeker türevini fermente edebiliyorsa, bromokresolün mor rengini mordan sarıya değiştiren pH'ı düşüren asit üretilir.

Dahası, eğer bir 'aerojenik bakteri' ise, hem asit hem de gaz (C02) üretilirken, bir ananaerojenik bakteri ise, sadece gaz hiç asitsiz üretilir. Gaz üretimi, ters bir Durham tüpünde (minyatür bir test tüpü) bir baloncuk olarak birikmesiyle gösterilir.

Karbonhidrat fermantasyon testinde, test bakterileri, şekerlerden veya şeker türevlerinden birini ve bromocresol morunu içeren bir et suyu ortamında büyütülür. Tersine çevrilmiş bir Durham tüpü suya batırılmış halde tutulur.

Bakteriler “şeker veya şeker türevini fermente etme kabiliyetine sahipse, et suyunun rengi mordan sarıya değişir. Durham tüpünde gaz birikmesi bir kabarcık olarak görülüyorsa, bu bir akrojenik bakteridir, gaz birikimi görülmezse, anaerojen bir bakteridir.

Gerekli malzemeler:

Test tüpleri, Durham tüpleri, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama döngüsü, otoklav, bunsen brülör, laminer akış odası, atma kavanoz, kuluçka makinesi, karbonhidrat suyu (glikoz, sukroz, laktoz, maltoz, ksiloz gibi spesifik şeker veya şeker türevlerini içeren et suyu aesculin, salisin, adonitol, dulcitol, sorbitol vb.), izole edilmiş koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. Karbonhidrat et suyu besiyerinin bileşenleri (ana bileşenleri olarak mor olan gerekli karbonhidrat ve bromosresol içeren) veya et suyunun 100 ml'si için gereken hazır tozu tartılır ve 250 ml konik bir şişede 100 ml damıtılmış su içinde çözülür. Çalkalayarak ve döndürerek (Şekil 7.8).

2. pH değeri, bir pH kağıdı veya pH ölçer kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HC1 veya daha azsa 0.1N NaOH kullanılarak 6.8'e ayarlanır. Şişe, gerekirse bileşenleri tamamen çözmek için ısıtılır.

3. Et suyu beş test tüpüne (her biri yaklaşık 10 ml) dağıtılır.

4. Bir Durham tüpü, her test tüpündeki et suyuna ters çevrilmiş halde yerleştirilir. Durham tüpleri içlerinde hava içerir ve yüzer. Sterilizasyon sırasında, sıcak buhar, suyu topladıkları için bu havayı yerinden oynatır. Bu nedenle, sterilize etmeden önce et suyuna batırılmaları için sterilizasyondan önce et suyuyla doldurularak Durham tüplerinin içindeki havanın boşaltılmasına gerek yoktur.

5. Test tüpleri koton tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlanmış.

6. Et suyu tüpleri 121 ° C'de (15 psi basınç) 15 dakika otoklavda sterilize edilir. Alternatif olarak, 90 ml bazal ortam (karbonhidrat içermeyen ortam) otoklavda sterilize edilir ve buna soğutulduktan sonra, membran süzme ile sterilize edilen 10 ml karbonhidrat çözeltisi (% 10) ilave edilir. Bu, özellikle ısı sterilizasyonu sırasında bozulmaya uğrayan ısıya duyarlı karbonhidratlar için önemlidir.

7. Et suyu tüplerinin oda sıcaklığına soğumasına izin verilir.

8. Test bakterileri, aseptik olarak, tercihen bir laminer akış odasında, bunsen alevi üzerinde sterilize edilmiş bir aşılama döngüsünün yardımı ile et suyu içine aşılanır. Her aşılamadan sonra döngü sterilize edilir.

9. Aşılanmış çorba tüpleri, bir inkübatörde 24 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edilir.