Bir Bakterinin Sitratı Karbon Kaynağı Olarak Kullanabilme Yeteneğini Kontrol Etmek İçin Sitrat Kullanma Testi

Sitrat kullanım testi yapmayı ve bakterilerin tek karbon kaynağı olarak sitrat kullanabilme yeteneklerini ortaya çıkarmayı hedefler.

Prensip:

Bazı bakteriler, organik C ve N olmadan ortamlarda çoğalabilirler.

Tek C kaynağı olarak sodyum sitrat ve N'nin tek kaynağı olarak amonyum dihidrojen fosfat (NH4H2P04) kullanabilirler. NH3 üretimi ile N elde etmek için NH4H2P04 kullanırlar. pH, bromothymol mavisinin renginde yeşilden (pH = 6.9) maviye (pH 7.6'nın üzerinde) bir değişikliğe neden olur.

Sitrat kullanım testinde, test bakterileri, organik C veya N içermeyen, sodyum sitrat, NH4H2P04 ve bromotimol mavisi içeren agar slantlarında büyütülür. Bakterilerin tek C kaynağı olarak sitrat kullanma kabiliyeti varsa, yatıklarda büyüme gösterir. Ayrıca, N'nin tek kaynağı olarak, NH4H2P04'ü, meyillerin renginde yeşilden maviye bir değişiklik ile sonuçlanan olarak kullanır.

Gerekli malzemeler:

Test tüpleri, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama iğnesi, otoklav, bunsen brülörü, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, Simmons sitrat agarı, izole edilmiş koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. Simmons sitrat agar besiyerinin bileşenleri (sodyum sitrat, NH4H, P04 ve ana içerikler olarak bromothymol mavisi içerenler) veya 100 ml besiyeri için gereken hazır toz tartılır ve 100 ml distile içinde çözülür. Çalkalanarak ve döndürülerek 250 ml'lik bir konik balonun içindeki su (Şekil 7.6).

2. pH değeri bir pH kağıdı veya pH ölçer kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HC1 veya daha az ise 0.1 N NaOH kullanılarak 6.9'a ayarlanır.

3. Şişe, agarı ortam içinde tamamen çözmek için ısıtılır.

4. Katılaşmadan önce, sıcak erimiş haldeki ortam 5 test tüpüne (her biri yaklaşık 20 mi) dağıtılır.

5. Test tüpleri koton tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlanmış.

6. Bir otoklavda 121 ° C'de (15 psi basınç) 15 dakika sterilize edilirler.

7. Sterilizasyondan sonra, otoklavdan çıkarılır ve sitrat agar slantlarını elde etmek için besiyerini soğutmak ve katılaştırmak için eğimli bir pozisyonda tutulur.

8. Test bakterileri, aseptik olarak, tercihen laminer bir akış odasında, alın içine bıçaklanarak ve alevle sterilize edilmiş bir iğne yardımı ile çekiklerin yüzeyinde çizik yapılarak eğiklere aşılanır. İğne her aşılamadan sonra sterilize edilir.

9. Aşılanan slantlar bir inkübatörde 24 ila 48 saat 37 ° C'de inkübe edilir.