Kan Pıhtılaşma Yeteneklerini Bulmak İçin Bakterilerde Koagülaz Testi (Şekil ile)

Kanın Pıhtılaşma Yeteneklerini Bulmak İçin Bakterilerde Koagülaz Testi (Şekil ile)!

Prensip:

Bakterilerin patojenik suşları Staphylococcus, fibrinojeni fibrine dönüştürmek için içinde bulunan dokuları barındıran enzim koagülazını içerir.

Oluşan fibrin örgüsü bakteri hücrelerini veya enfekte olmuş dokuları çevreler, bakterileri fagositoz ve normal serumun anti-stafilokokal aktivitesi gibi spesifik olmayan konak direnç mekanizmalarından korur.

Bu enzim ayrıca kandaki pıhtılaşan veya pıhtılaşan trombin benzeri bir maddenin ön maddesi olarak konakçıdaki kanın pıhtılaşmasında yardımcı olur. Koagülaz testi, koagülaz pozitif (patojenik veya virülan)) ve koagülaz negatif (patojenik olmayan veya avirulent) Stafilokok arasında ayrım yapmak için yapılır.

Koagülaz testinde, Staphylococcus'un test türlerinin bir süspansiyonu kan plazması ile karıştırılır ve aşılanan plazma daha sonra periyodik olarak fibrin oluşumu veya pıhtılaşma açısından incelenir.

Dört saat içinde pıhtı oluşumu olumlu bir sonuç olarak yorumlanır ve virülent (patojenik) bir Staphylococcus suşunun göstergesi olarak yorumlanır. 24 saatlik inkübasyondan sonra pıhtılaşmanın olmaması, virülan (patojenik olmayan) bir suşun göstergesi olan negatif bir sonuçtur.

Gerekli malzemeler:

Laboratuar hayvanı (tavşan veya gine domuzu), şırınga, antikoagülan (sodyum sitrat veya heparin), kan toplama tüpleri, santrifüj, test tüpleri, slayt, aşılama döngüsü, bunsen brülör, laminer akış odası, kavanoz atma, izole koloniler veya saf bakteri kültürleri cinsinin Staphylococcus.

Prosedür:

1. Şırınga ve kan toplama tüpleri, toplandıktan hemen sonra kanın pıhtılaşmasını önlemek için sodyum sitrat veya heparin çözeltisi ile yıkanır (Şekil 7.24).

2. Şırınga yardımıyla, tavşan veya kobay gibi laboratuvar hayvanlarından kan alınır ve toplama tüplerine konur.

3. Kan 3000 rpm'de 15 dakika santrifüjde santrifüjlenir.

4. Süpernatan (plazma) başka bir sitratlı test tüpüne toplanır ve kalıntı (kan hücreleri) atılır.

(a) Slayt Yöntemi:

1. Staphylococcus cinsine ait test bakterilerinin bir süspansiyonunun iki damlası, bir aşılama döngüsü yardımı ile bir lamın eşit olarak bölünmüş iki yarısına konur. Bir damla, bakterilerin kendisinin kümeler halinde olup olmadığını görmek için 'kontrol', diğer damla ise 'test' olarak kullanılır.

2. 'Test düşüşüne' bir damla toplanmış plazma eklenir, karıştırılır ve oda sıcaklığında inkübe edilir.

3. Damlalar, 4 saate kadar saatlik aralıklarla gözlenir.

(b) Tüp Yöntemi:

1. İki küçük test tüpü alınır. Bir test tüpü 'test' ve diğer 'kontrol' olarak işaretlenmiştir. Her test tüpünde, 0.5 ml bakteri süspansiyonu alınır.

2. 'Test' tüpüne 1 ml plazma eklenir, karıştırılır ve inkübe edilir

3. Tüpler 4 saate kadar saatlik aralıklarla gözlenir.