Embriyonlu Civciv Yumurtalarında Hayvan Virüsünü Yetiştirmek için Deney (Şekilli)

Embriyonize piliç yumurtasında hayvan virüsünü yetiştirmek için deney yapın!

Prensip:

Virüsler yalnızca canlı sistemlerde büyüyebilir. Besin agarı veya besin suyu gibi canlı olmayan ortamlarda yetişemezler. Bu nedenle yetiştiriciliğinin spesifik virüse duyarlı konakçı hücrelere ihtiyacı vardır.

Bakteri hücrelerinde enfekte olan ve büyüyen bakteriyofaj gibi virüs, canlı hücre olarak bakteri hücrelerinin kültürleri kullanılarak yetiştirilir.

Örneğin, virüs kolipajı (bir bakteriyofaj), E. coli bakteri kültürü kullanılarak yetiştirilir. Buna karşılık, hayvanların vücudunda enfekte olan ve üreyen hayvan virüsleri, hassas canlı hayvan sistemleri gerektirir.

Laboratuarlarda hayvan virüslerinin yetiştirilmesinde kullanılan üç canlı hayvan sistemi aşağıdaki gibidir:

1. Duyarlı Hayvanlar:

Bu teknikte, ekilecek olan virüs, bu virüse karşı hassas olan fare veya gine domuzu gibi canlı bir hayvanın vücudunda çoğalabilir. Bu teknik artık daha yeni, verimli ve ekonomik tekniklerle değiştirilmemiştir.

2. Doku Kültürü:

Çok sofistike bir tekniktir. Burada, ekilecek virüse duyarlı olduğu ve ayrıca hızla çoğaldığı bilinen hayvan hücreleri ilk olarak bir hayvanın uygun canlı dokusundan izole edilir. Bu hücreler oldukça zengin bir beslenme ortamı içeren bir cam veya plastik kap içine yerleştirilir. Hücreler, kabın yüzeyine bağlanır ve tüm yüzey birleştirilmiş bir hücre tek tabakası ile kaplanıncaya kadar bölmeye devam eder. Buna doku kültürü denir.

Daha sonra, ekilecek virüs duyarlı doku kültürüne aşılanır. Virüs doku kültürünün canlı hücrelerini enfekte eder, metabolik makinelerini alt eder ve hızla çoğalır, böylece hücrelerde bolca büyür.

3. Embriyonlu Civciv Yumurtaları:

Bu basit ve ekonomik teknikte, yetiştirilecek olan virüs embriyonlu bir civciv yumurtasına enjekte edilir. Virüs, yaşayan civciv yumurtası içinde büyür ve embriyoda o virüse özgü çeşitli hastalık semptomları (sitopatojenik etkiler) ile kendini gösterir. Bu semptomların varlığı, o virüsün yumurta içindeki büyümesini gösterir.

Gerekli malzemeler:

İki embryonated civciv yumurtası, mumlama cihazı, tentür iyot, emici pamuk, % 70 alkol, küçük bir matkap, 1: 2 Newcastle virüsünün seyreltilmesi, şırınga, steril vasper, steril salin, petri kapları, bunsen burner, laminer akış haznesi, imha kavanoz, kuluçka makinesi.

Prosedür:

1. İki embriyonlu civciv yumurtası, embriyonun canlılığını göstermek için bir mumlama cihazı kullanılarak mumlanır. Embriyo, ışıktan gelen sıcaklığa tepki olarak hareket gösterirse yaşama kabiliyetine sahiptir. Ayrıca, hava kesesi ve büyük kan damarlarının pozisyonları, mumlama sırasında yumurta kabuğu üzerinde belirlenir ve işaretlenir (Şekil 8.7).

2. Kabuk, tentür iyotla hava kesesi üzerinde dezenfekte edilir ve sonra kurumaya bırakılır. Aynı yer, % 70 alkol ile ıslatılmış emici pamuk ile temizlenir.

3. Küçük bir matkabın ucu, % 70 alkol içerisine batırılarak ve daha sonra yakılarak sterilize edilir.

4. Bu matkabı kullanarak, kan damarlarından uzak bir bölgede hava kesesi üzerindeki kabuk üzerinde aseptik olarak küçük bir delik açılır.

5. Newcastle virüsünün 1: 2 oranında seyreltilmesinden 0.2 ml, sterilize edilmiş bir şırınga kullanarak iki yumurtadan birinin allantoik boşluğuna aseptik olarak enjekte edilir. Bu, yumurtayı dikey bir pozisyonda tutarak, şırınganın iğnesini kabuk üzerindeki delikten 45 ° açıyla kabuğuna sokarak, hava kesesi zarını delip allantoik boşluğa nüfuz ederek yapılır. Bu virüs aşılanmış yumurta 'test yumurtası' olarak işlev görür.

6. Aşılamadan sonra, iğne çekilir ve kabuk üzerindeki delik steril sıcak vasper ile kapatılır.

7. Aynı tekniği kullanarak, 0.2 ml steril salin, diğer kontrol tavuk civciv yumurtasına aşılanır ve bu da "kontrol yumurtası" olarak işlev görür.

8. Her iki yumurta da 37 ° C'de 3 - 4 gün kuluçka makinesinde uygun nemde kuluçkada bekletilir.

9. Her gün gözlemler not edilir.

10. Ölüm belirlendikten sonra, embriyo kabuğundan yerinden çıkar ve içeriği bir petri kabına dökülür ve tekrar gözlenir.

11. Tüm kirlenmiş malzemeler ağartma tozu içeren bir beher içine atılır.

Gözlemler:

1. Kuluçka sırasında yumurtalar her gün mumlanır ve genellikle virüsün aşılanmasından sonraki 3 ila 4 gün içinde gerçekleşen hareketin durması ile kanıtlandığı gibi embriyonik ölüm için gözlemlenir.

2. Ölüm belirlendikten sonra, embriyo kabuğundan yerinden çıkar ve içerikleri bir petri kabına dökülür. Nekrotik lezyonlarda ve kanama bulgularında görülür.

3. Kontrol yumurtası sitopatojenik etkilerin kanıtı için incelenir.

4. Gözlemler Tablo 8.2'ye kaydedilmiştir.