Bakterilerin Farklı Amino Asitleri Dekarboksilat Yapma Yeteneklerini Bulma Deneyi (Şekilli)

Bakterilerin farklı amino asitleri dekarboksilat etme kabiliyetini bulmak için deney yapın!

Prensip:

Bazı bakteriler, ilgili amino asit dekarboksilaz enzimlerini üretebildiklerinden, farklı amino asitleri karşılık gelen aminlere ve C02'ye dekarboksilasyon yeteneğine sahiptir.

Bunlar arasında, her bakteri amino asitlerin sadece bazılarını dekarboksilat ederken diğerlerini dekarboksilatlayamaz.

Böylece bir bakterinin dekarboksilat yapabildiği amino asitler ve yapamayacağı amino asitler, bakterilerin özelliğidir. Amino asit dekarboksilaz testi, ayrı ayrı, bir bakterinin lizin, ornitin ve argentin gibi amino asitleri C02 ve cadaverine, putresin ve agmatin gibi ilgili aminlerin üretimi ile dekarboksilat etme kabiliyetini test etmek için gerçekleştirilir.

Eğer bakteri yapabilir

amino asitlerin herhangi bir veya daha fazlasının dekarboksilatı, alkalin (bazik) olan ilgili aminler üretilir ve bu nedenle, bromokresolün mor rengini sarıdan maviye değiştiren pH'ı yükseltir.

Amino asit dekarboksilaz testinde, test bakterileri glikoz, mor bromosresol moru ve amino asitlerden birini içeren bir et suyu ortamında anaerobik olarak büyütülür. Et suyunun rengi, başlangıçta glukoz fermantasyonu ile üretilen asitlerden kaynaklanan pH'daki düşüş nedeniyle mordan sarıya değişir. Bakteriler amino asidi dekarboksilasyon yeteneğine sahipse, et suyunun rengi sarıdan maviye döner.

Gerekli malzemeler:

Test tüpleri, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama döngüsü, otoklav, bunsen brülör, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, amino asit dekarboksilaz suyu, amino asitler (lisin, ornitin, arginin), sıvı parafin, izole edilmiş koloniler veya saf kültürleri bakteriler.

Prosedür:

1. Amino asit dekarboksilaz et suyu besiyeri (ana bileşenler olarak mor glukoz ve bromokresol içeren) ya da 400 ml et suyu için gereken hazır tozu tartılır ve 500 ml konik bir şişede 400 ml damıtılmış su içinde çözülür. Çalkalayarak ve dönerek (Şekil 7.11).

2. pH değeri bir pH kağıdı veya pH ölçer kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak 7.2'ye veya daha az ise 0.1 N NaOH kullanılarak 7.2'ye ayarlanır. Şişe, gerekirse bileşenleri tamamen çözmek için ısıtılır.

3. 400 ml'lik broth, her 250 ml'lik broth içeren 100 ml'lik dört konik şişeye dağıtılır.

4. Bu şişelerden üçüne, lizin, ornitin ve arginin gibi üç amino asit ayrı ayrı eklenir (her biri 0.5 gram) ve biri kontrol olarak görev yapacak herhangi bir amino asit olmadan tutulur. Kontrol, test ortamındaki iki aşamalı renk değişimlerini ayırt etmek için kullanılır (yani, mordan sarıya ve sarıdan mora).

5. Dört konik şişedeki et suyu, dört ayrı test tüpü setine (her biri yaklaşık 10 ml), pamuk tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlanmış şekilde dağıtılır.

6. Et suyu tüpleri 121 ° C'de (15 psi basınç) 15 dakika otoklavda sterilize edilir.

7. Et suyu tüplerinin oda sıcaklığına soğumasına izin verilir.

8. Sıvı parafin, sıcak hava fırınında 3 saat boyunca 180 ° C'de ısıtılarak sterilize edilir.

9. Test bakterileri, aseptik olarak, tercihen bir laminer akış odasında, bunsen alevi üzerinde sterilize edilmiş bir aşılama döngüsünün yardımı ile et suyu içine aşılanır. Her aşılamadan sonra döngü sterilize edilir.

10. Sterilize edilmiş sıvı parafin, anaerobik durumu sağlamak için inoküle edilmiş tüplere (besiyeri yaklaşık 1 cm yüksekliğinde) aseptik olarak yavaşça dökülür.

11. Aşılanmış çorba tüpleri 37 ° C'de bir inkübatörde inkübe edilir ve test pozitif olana veya maksimum 4 günlük bir süre boyunca günlük olarak gözlemlenir.

Gözlemler: