Bilinmeyen Bakterilerin Belirlenmesi Deneyi (Şekilli)

Bilinmeyen bakterilerin tanımlanması için deney!

Prensip:

Bilinmeyen bakterilerin tanımlanması, mikrobiyologların en önemli sorumluluklarından biridir. Kan, doku, yiyecek, su ve kozmetik örnekleri, bulaşıcı mikroorganizmaların varlığı için dünya genelinde laboratuvarlarda günlük olarak incelenmektedir.

Ek olarak, endüstriyel kuruluşlar vitaminler, çözücüler ve enzimler gibi pazarlanabilir ürünlerin verimini artıracak yeni antibiyotik üreten mikropları veya mikropları izole etmek için sürekli olarak materyal taramaktadır. İzole edildikten sonra, bu bilinmeyen mikroplar tanımlanmalı ve sınıflandırılmalıdır.

Sınıflandırma bilimine taksonomi denir ve canlı organizmaların birbirleriyle ilişkili gruplara ayrılmasıyla ilgilenir. Bergey'nin 8. baskıdaki Determinant Bakteriyoloji El Kitabı, bilinen tüm sınıflandırılmış bakterilerin sıralarını, ailelerini, cinslerini ve türlerini içeren resmi taksonomik anahtardır (Ek III).

Boyama yöntemleri, izolasyon teknikleri, bakteri beslenmesi, biyokimyasal aktiviteler ve bakterilerin üreme özellikleri hakkındaki temel bilgiler sayesinde bilinmeyen bakterilerin tanımlanması kolaylaşır.

Az sayıda bakterinin özellikleri Tablo 7.2'de verilmiştir. Diğer bakteriler, deney prosedürlerini takiben elde edilen gözlem ve sonuçlara dayanarak benzer bir şekilde tanımlanabilir.

Gerekli malzemeler:

Slaytlar, boşluklu slaytlar, petri kabı, konik şişeler, pamuk tıkaçları, aşılama halkası, otoklav, bunsen burner, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, besi suyu, besiyeri agarı, gram boyama reaktifleri, besiyeri ve reaktifler, biyokimyasal testler izole edilmiş koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. Bilinmeyen bakterilerin gram boyama işlemi gerçekleştirilir. Gram boyamanın yanı sıra morfolojisi ve düzeni de kaydedilir. Bakterilerin hareketlilik testi, asılı damla hazırlığı ile belirlenir (Şekil 7.25).

2. Steril aşılama tekniği kullanılarak, bakteriler iki besinsel agar çekicisine, bir besleyici et suyu tüpüne ve çizgi aşılama yoluyla bir besleyici agar plakasına aşılanır. Kuluçkadan sonra, bilinmeyen bakterilerin kültürel özelliklerini belirlemek için bir meyilli kültür kullanılır.

İkincisi, testlerden herhangi birinin tekrarlanması gerektiğinde, stok alt kültürü olarak kullanılır. Büyüme özellikleri ayrıca et suyu tüpünde ve plaka üzerindeki koloni özelliklerinde de gözlenir.

3. Kültürleri kontamine etmemek ve böylece sahte sonuçlar elde etmek için steril teknikte özen göstermek, bakteriler, farklı biyokimyasal testleri yapmak için ilgili ortamlara aşılanır.

4. Aşılanan ortam, istenen süre boyunca istenen sıcaklıklarda inkübe edilir.

Gözlemler:

1. Gram boyamada, gram reaksiyonun yanı sıra bakterilerin morfolojisi ve düzeni de kaydedilir.

2. Bakterilerin, besiyerinde, agar çekirdeğinde ve besin agar plakasında kültürel özellikleri not edilmiştir.

3. Biyokimyasal reaksiyonların sonuçları kaydedilir.

Sonuçların yorumlanması:

1. Yukarıda kaydedilen verileri kullanarak (Örneğin, Tablo 7.1'e bakınız) ve Bergey'nin Belirleyici Bakteriyoloji El Kitabı'nın yardımıyla bakteri, cins ve türlerine göre tanımlanır. Sonuçların kullanılan her türün suşuna ve bakterilerin stok kültüründe tutulduğu sürenin uzunluğuna bağlı olarak değişebileceği unutulmamalıdır.

Gözlenen sonuçlar, beklenen sonuçlarla tamamen aynı olmayabilir. Bu nedenle, sonuçlara en uygun bakteriler seçilir. Az sayıda bakterinin belirleyici özellikleri Tablo 7.2'de verilmiştir.

2. Alternatif olarak, yukarıda kaydedilen verileri kullanarak, kaydedilen sonuçlar için kod numaraları verilmiştir (Tablo 7.3'e bakınız) ve Apple II, IBM PC veya TRS-80 için mevcut bilgisayar programı yardımıyla kolayca tanımlanmış bakteriler.

Program, bilinmeyen bakterileri, yukarıdaki gözlemlere göre bilinmeyen bakteriler ve bilinen bakteriler arasındaki benzerlik yüzdesine dayanarak belirlemek için tasarlanmıştır.

Apple II veya IBM PC için programı başlatmak için:

(a) Disk soldaki sürücüye yerleştirilmiş.

(b) Bilgisayar açık.

(c) Program talimatlarını, sorular ekranda göründüğünde verilen cevapları, bilinmeyen bakteri numaralarını ve kod numaralarını girerek takip edin.

TRS-80 için programı başlatmak için:

(A) Bilgisayar açık.

(B) Disk alt sürücüye yerleştirilmiş.

(D) Sorulduğunda, “tarih (AA / GG / YY)” girilir.

(E) Turuncu tuşa tekrar basıldı.

(f) Program talimatlarını cevaplar, bilinmeyen bakteri sayısı ve sorular ekranda göründüğünde kod numaraları yazarak takip edilir.

E. Bilinmeyen Bakterilerin Tanımlanması için Otomatik Yöntemler:

Bilinmeyen bakterilerin boyanma reaksiyonları, hareketlilik testi, kültürel özellikler ve biyokimyasal testler kullanılarak manuel yöntemle tanımlanması hantal, uzun ve zaman alıcı bir işlemdir. Süreci kolaylaştırmak ve kısaltmak için otomatik yöntemler geliştirilmiştir.

Bu yöntemler temel olarak manuel yöntemlerde kullanılan biyokimyasal testleri kullanır, ancak burada otomatik olarak yapılır ve yorumlama bilgisayar destekli bir programla yapılır.

Şu anda bakterilerin otomatik tanımlanması için kullanılan bu iki sistem aşağıdaki şekilde verilmiştir:

1. MINI API Sistemi

2. VITEK 2 Sistemi

F. Ek Onay:

(1) Serolojik Testler:

Tanımlanan bakterilerin daha fazla doğrulanması için serolojik testler yapılabilir. Tanımlanan bakterilerin (örneğin X) süspansiyonuna, bu bakterilere karşı bir miktar antiserum (anti-X) karıştırılır. Topakların veya çökeltilerin oluşumu ile sonuçlanırsa (X-anti-X kompleksi), tanımlama onaylanır.

Farklı bakteriler için antiserumlar ticari olarak temin edilebilir. Ticari olarak farklı laboratuvarlarda üretilirler. Belirli bakterilerin antiserumu, bu bakterilerin öldürülmüş veya zayıflatılmış hücrelerinin bir laboratuar hayvanına enjekte edilmesiyle üretilir.

Bir savunma mekanizması olarak, konakçı hayvan kanda kalan o bakteriye karşı antikorlar (anti-X) üretir. Kan bu hayvandan toplanır ve serumu özel tekniklerle izole edilir. Bu bakterilere karşı antikor içeren bu seruma, bu bakterilerin antiserumu denir.

(2) PCR Testi:

Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) testi, tanımlanmış bakterilerin doğrulanması için hızlı bir moleküler yöntemdir. Bu teknik, sıklıkla çeşitli bakteri ve virüslerin hızlı ve hassas bir şekilde saptanmasında kullanılır.