Deney: Bir Bakterinin Hareketlilik Testi: Damla Hazırlama Asılı (Şekilli)

Hareketli veya hareketsiz olup olmadığını bulmak için damla preparasyonunu asarak bakterilerin hareketlilik testini yapmayı hedefleyin.

Amaç:

Hareketlilik, kendi gücüyle hareket kabiliyeti anlamına gelir. Hareketliliğe bağlı olarak, bakteriler aşağıdaki gibi iki gruba ayrılabilir.

(1) Motil Bakteriler:

Asılı kaldığı çevre ortamda, içsel hareket kabiliyetine sahip olan bir bakteri, hareketli bir bakteridir.

(2) Hareketsiz Bakteriler:

Asılı kaldığı çevre ortamda, içsel hareket kabiliyetine sahip olmayan bir bakteri, hareketsiz bir bakteridir. Hareketli olmayan bakteriler, bakteri hücreleri üzerindeki çevre ortamda su moleküllerinin bombardımanından kaynaklanan kahverengileşen hareketlerinden kaynaklanan belirgin bir hareketlilik gösterebilir.

Islak montajda, bakteri şekli ve boyutu gözlenebilse de, süspansiyon slayt ve kapak kayması arasına bastırıldığı için hareketlilik engellenebilir. Bu yüzden; asılı damla hazırlama veya hareketlilik testi, bakteri hareketliliğinin şekil ve büyüklüklerinin yanı sıra net bir şekilde gözlemlenmesi için gerçekleştirilir. Bakterilerin tanımlanmasında yararlıdır.

Prensip:

Çok küçük bir bakteri süspansiyonu damlası, bir kapak kaymasının ortasından bir boşluk kızağının oyuğuna asılır. Asılı damla, yağa batırma hedefi kullanılarak bir mikroskop altında gözlenir. Bakteriler hareketliyse, hücrelerinin çevre ortamda düzensiz hareket ettiği görülebilir.

Aksine, eğer hareketli değilse, hücreleri ortam içerisinde herhangi bir hareket olmadan statik kalır veya bakteri hücreleri üzerinde ortamdaki su moleküllerinin bombardımanından kaynaklanan kahverengileşme hareketi gösterebilir.

Gerekli malzemeler:

Kavite kayması, kapak kayması, petrol jeli veya vazelin, daldırma yağı, 24 saatlik bakteri et suyu kültürü, ilmik ve mikroskop (bileşik, karanlık alan veya faz kontrastı).

Prosedür:

1. Bir oyuk kızağı, musluk suyu altında düzgün bir şekilde temizlenir, böylece su, yüzeyinde bir damla olarak kalmaz. Boşluklu bir slayt, içine küçük bir bakteri süspansiyonunun asılabileceği küçük, yuvarlak bir çöküntüye sahip bir cam slayttır (Şekil 5.3).

2. Sürgü, bibulous kağıt ile silinerek ve ardından alev üzerinde hareket ettirilerek veya güneşte tutularak kurutulur.

3. Boşluğun çevresine bir petrol jölesi (veya vazelin) halkası uygulanır.

4. Bir ilmek alev üzerine sterilize edilir ve soğutulur. 24 saatlik et suyu kültüründen bir miktar bakteri süspansiyonu aseptik olarak alınır. Süspansiyonun küçük bir damlası, bir kapak slipinin ortasına yerleştirilir. Et suyu kültürü 24 saatten eski olmamalıdır, çünkü bakteri yaşlandıkça hareketliliğini kaybedebilir.

5. Boşluk sürgüsü ters çevrilir ve boşluğun damlayı kapsayacak şekilde kapak kaymağına yerleştirilir.

6. Kızak ve kapak kayması, boşluk mühürlenecek şekilde yavaşça birbirine bastırılır. Boşluğun hiçbir bölümünün damlaya temas etmemesine dikkat edilmelidir.

7. Sürgü hızlı bir şekilde ters çevrilir, böylece düşme temas etmeden boşluğa asılır.

8. Slayt, mikroskobun aşamasına kırpılır.

9. Düşüşün kenarı, düşük güç hedefi altında odaklanmıştır.

Damla kenarına odaklanma nedenleri şunlardır:

(a) Düşüşün kırılma endeksindeki ve kapak kaymadaki fark nedeniyle daha iyi kontrast elde edilir.

(b) Damla asılıyken, kenara hareket kabiliyeti için açıkça gözlenecek daha az sayıda bakteri içeren kenara doğru incelir.

(c) Genellikle aerobik bakteriler, solunum için daha fazla oksijen almak üzere kenarlarına doğru gelirler, bunun için kenarda gözlenebilirler.

10. Asılı damlanın hemen yukarısındaki kapak slipine bir damlama yağı damlatılır ve mikroskobun yağa batırılma amacı altında asılı damlanın kenarı gözlenir. Tercihen, net bir gözlem için bir faz kontrastı veya karanlık alan mikroskobu kullanılmalıdır.

Gözlemler (Yağa Daldırma Hedefinde):

1. Hareketlilik:

Hareketli veya hareketsiz

2. Bakterilerin Şekli:

Küresel (coccus)

Çubuk şeklindeki (basil)

Virgül benzeri (vibrio)

Spiral (spiroketler)

3. Bakterilerin düzenlenmesi:

Çiftler (diplobacillus / diplococcus)

Dört ayaklı (tetrads)

Zincirlerde (streptococcus / streptobacillus)

Üzüm benzeri kümeler (staphylococcus)

Cuboidal (sarcinae veya oktet).

4. bakteri boyutu:

Göz tahmini ile, alanın içine daldırma hedefi çizerek yapın.

(3) Boyama:

Lekelenmenin Amacı:

Bakteri hücrelerinin kırılma indisi, gözlem sırasında askıya alındıkları suya ve ayrıca mikroskop altında gözlemlendikleri cam lamına yakındır. Bu nedenle, onları açıkça gözlemlemek çok zordur.

Bu zorluğun üstesinden gelmek için, hücreler, hücrelere koyu renk ve asılı oldukları çevre ortama açık renk veren lekeler ile renklendirilir. Koyu renkli hücreler, açık renkli arka plana karşı net bir kontrast sağlar ve net bir şekilde gözlenebilir.

Dolayısıyla, boyama, mikroskopik gözlemleri için 'lekeler' adı verilen çeşitli biyolojik boyaların yardımı ile aksi takdirde renksiz şeffaf mikroorganizmalara renk vermenin bir yöntemidir.

Lekelerin Kimyası:

Renklendirme ajanları aşağıdaki gibi üç tiptedir:

1. Boyalar:

Tekstil malzemelerini renklendirmek ve duvarları renklendirmek gibi genel amaçlı renklendirmelerde kullanılırlar.

2. Lekeler:

Biyolojik veya mikrobiyolojik örneklerin renklendirilmesinde kullanılırlar. Bunlar daha doğru ve titiz.

3. Göstergeler:

Hidrojen iyonu konsantrasyonundaki (pH) değişim ile renk değiştiren kimyasallardır.

'Leke' uygun terim olsa da, 'boya' terimi, renklendirme maddelerini ifade etmek için mikrobiyolojide yaygın olarak kullanılmaktadır. Geçmişte, çeşitli bitkilerden doğal boyalar hazırlandı. Yaygın olarak sentetik boyalar ile değiştirilmiştir.

İlk sentetik boya, anilinden hazırlandığı için, tüm sentetik boyalara 'anilin boyaları' denir. Bununla birlikte, bu boyaların çoğu, artık 'kömür katranı boyaları' olarak adlandırılan kömür katranından üretilmektedir. Kömür katranı boyaları benzen türevleridir. Bir boya molekülü, aşağıda gösterildiği gibi üç bileşenden (Şekil 5.4) oluşur.

(a) Bir benzen halkası

(b) Bir kromofor grubu

Benzen organik renksiz bir çözücüdür, kromofor ise boyanın renklendirici bileşenidir. Benzen, kromofor oluşturmak için kromoforla birleşir (Şekil 5.5). Kromojen ayrışma özelliğine sahip olmadığından, hücrelerle birleşemez ve kolayca yıkanır.

Bir kromojen yardımcı bir renkle birleştiğinde, bir boya veya leke oluşur. Yardımcı renk, elektrolitik ayrışma özelliğini (tuz oluşturma özelliği) boyaya verir. Böylece, kimyasal olarak leke bir benzen halkası, bir kromofor grubu ve bir yardımcı renk grubu içeren organik bir bileşik olarak tanımlanmaktadır.

Boyama Türleri:

Bakterilerin boyanması aşağıda tarif edildiği gibi farklı tiplerdedir (Şekil 5.6).

I. Basit Boyama:

Burada sadece bir boya kullanılır. Bu boyama, bakterilerin şeklini (kok, basili, vibrio, spirilli) ve düzenini (tek, çift, tetrad, zincir, küme) gözlemlemek için kullanılır.

Aşağıdaki iki tiptedir:

A. Temel Boyama:

Bazik lekelemede, bakteri hücrelerini lekelemek için metilen mavisi, kristal menekşe veya carbol fuşsin gibi bazik bir boya kullanılır. Leke bakteri hücrelerine sıkıca bağlanır ve hücrelere lekenin derin bir rengini verirken, çevre ortam lekenin açık rengini alır.

B. Asidik Boyama:

Asidik boyamada, bakteri hücrelerini negatif olarak lekelemek için eozin veya nigrosin gibi bir asidik leke kullanılır. Leke çevreyi renkli yapar, bakteri hücresi renksiz kalır.

II. Diferansiyel Boyama:

Burada birden fazla lekeler kullanılıyor. Aşağıdaki amaçlar için gerçekleştirilir.

A. Gruplara Ayırma:

Bu diferansiyel boyama yöntemleri, bakterileri boyama özelliklerine bağlı olarak farklı gruplara ayırmak için gerçekleştirilir.

Bu yöntemler aşağıdakileri içerir:

(a) Gram boyama:

Bu boyama yöntemi, gram pozitif ve gram negatif bakterileri ayırt etmek için gerçekleştirilir.

(b) Asit-hızlı Boyama:

Aside dirençli ve asit içermeyen bakteriler arasında ayrım yapmak için yapılır.

B. Bakterilerin Özel Yapılarının Görselleştirilmesi:

Bu diferansiyel boyama yöntemleri, bakteri hücrelerinin spesifik yapısal bileşenlerini görselleştirmek için gerçekleştirilir.

Bu yöntemler aşağıdakileri içerir:

(a) Spor Boyama:

Bu boyama yöntemi, spor oluşturan bakterilerin endosporunu boyamak için kullanılır.

(b) Kapsül Boyama:

Bu yöntem, kapsüllenmiş bakterileri çevreleyen kapsülü lekelemek için kullanılır.

(c) Flagella Boyama:

Flagellenmiş bakterilerin flagellalarını görselleştirmek için yapılır.

(d) Dahil Boyama:

Bu boyama yöntemi volutin granüller, glikojen granüller ve PBH granülleri gibi bakteri hücrelerinin hücre içeriklerini lekelemek için gerçekleştirilir.