Hidroliz Lipidlerine Yeteneklerini Bulmak İçin Bakterilerde Lipid Hidroliz Testi (Şekil)

Bir bakterinin lipitleri (yağlar) hidrolize etme kabiliyetini bulmak için lipit hidroliz testi hakkında bilgi edinmek için bu makaleyi okuyun!

Prensip:

Bazı bakteriler, lipolitik enzim 'lipaz' a sahip oldukları için lipidleri (yağları) gliserol ve yağ asitlerine hidrolize etme kabiliyetine sahiptir.

Bu bakterilere lipolitik bakteri denir. Lipitler bir emülsiyon oluştururken, agar içinde dağıtıldığında, opaklık üretir, bunların hidrolize son ürünleri, gliserol ve yağ asitleri, agar ile böyle bir opaklık üretmeyen bu emülsiyonu oluşturmaz; şeffaflığı sağlamak yerine.

Lipid hidroliz testinde, test bakterileri, lipit substratı olarak tributyrin içeren agar plakaları üzerinde büyütülür. Tributyrin, agar içinde dağıtıldığında opak bir ortam üreten bir emülsiyon oluşturur.

Bakteriler lipidleri hidrolize etme kabiliyetine sahipse, kolonileri, çevrelerinde bulunan bölgelerde tributyrini çözünür gliserol ve yağ asitlerine (butirik asit) hidrolize ederken, plakaların geri kalan kısımları hidrolize edilmemiş tributyrin içerir.

Sonuç olarak, koloniler etrafında saydam berrak bölgeler oluşur, bunların etrafında oluşan hidrolize ürünler, gliserol ve yağ asitleri, agar ile emülsiyon oluşturmazlar. Öte yandan, plakaların geri kalan bölümlerinin opak kalması nedeniyle, bu bölgelerdeki hidrolize edilmemiş tributyrin, agar ile bir emülsiyon oluşturur.

Gerekli malzemeler:

Petri kapları, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama döngüsü, otoklav, bunsen brülörü, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, tributyrin ağarı, izole koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. İki petri kabı temizlenir, kağıtla kaplanır ve iplik veya lastik bant ile bağlanır (Şekil 7.22). Bu adım ve ayrıca 6. adımda petri kaplarının sterilizasyonu, eğer fırında sterilize edilmiş petri kaplarının doğrudan kullanılması durumunda atlanır.

2. Tributyrin agar besiyerinin bileşenleri (lipid bileşeni olan tributyrin hariç) veya 100 ml besiyeri için gereken hazır toz tartılır ve çalkalanarak 250 ml konik bir şişede 100 ml damıtılmış su içinde çözülür ve girdap gibi.

3. pH değeri, bir pH kağıdı veya pH metre kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak veya daha azsa 0.1N NaOH kullanılarak 7.2'ye ayarlanır.

4. Şişe, agarı ortam içinde tamamen çözmek için ısıtılır.

5. Yaklaşık 90 ° C'ye soğutulduktan sonra tributyrin ilave edilir ve bir Warring karıştırıcısında emülsiyon haline getirilir.

6. Şişe pamuk tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlanmış.

7. İki petri kabı ve tributyrin agar besiyerini içeren konik şişe, bir otoklavda 15 dakika boyunca 121 ° C'de (15 psi basınç) sterilize edilir.

8. Sterilizasyondan sonra, otoklavdan çıkarılır ve ortamın katılaşmasına izin vermeden bir süre soğumaya bırakılır. Ortamın soğutulması plakaların içinde su damlacıklarının yoğunlaşmasını ve birikmesini önler. Ortam, depolama sırasında önceden hazırlanmış ve katılaşmışsa, tamamen eriyene kadar dikkatlice ısıtılarak sıvılaştırılmalıdır.

9. Tributyrin agar plakalarını hazırlamak için, sterilize edilmiş tributyrin agar besiyeri soğumadan ve katılaşmadan önce, ılık erimiş durumda, aseptik olarak, tercihen bir laminer akış odasının içine, iki sterilize edilmiş petri kabına (her biri yaklaşık 20 ml) dökülür. erimiş ortam, petri kabının tabanını tamamen kaplar.

Sonra, plakalar kapaklarıyla kapatılır ve içindeki ortamı katılaştırmak için soğumaya bırakılır. Tributyrin, agar içinde dağıtıldığında opak bir ortam üreten bir emülsiyon oluşturur. Plakaların ve kapakların iç yüzeyinde yoğunlaşabilen su buharı, plakaları ve kapaklarını bir inkübatörde 37 ° C'de yaklaşık 1 saat süreyle ters konumda tutularak buharlaştırılır.

10. Her plaka alt tarafta dörtte üçü olarak işaretlenmiştir.

11. Test bakterilerinin "spot inokülasyonu", alevle sterilize edilmiş bir ilmek yardımı ile bakterilerin bir spotunu (veya küçük bir lekesini) yaparak her çeyreğin ortasındaki aseptik olarak, tercihen laminer bir akış odasının içinde yapılır. Her aşılamadan sonra döngü sterilize edilir.

12. Aşılanmış plakalar, bakteri kolonileri görülene kadar inkübatörde, yukarıdan aşağıya, 37 ° C'de 24 ila 48 saat boyunca bir inkübatörde inkübe edilir.