Nitratları Azaltma Yeteneğini Bulmak İçin Bakterilerde Nitrat Azaltma Testi

Nitratları azaltma yeteneklerini bulmak için bakteriler üzerindeki nitrat azaltma testinin performansını öğrenmek için bu makaleyi okuyun!

Prensip:

Bazı bakteriler nitratları azaltma yeteneğine sahiptir, çünkü 'nitrat redüktaz' enzimini üretebilirler.

Bu enzim, uygun elektron donörünün varlığında nitratları (N03 ^- ) nitritlere (N02 ^- ) düşürür. N02 ^- nin varlığı, rengi kırmızıya çeviren sülfanilik asit ve bir-naftilamin ile belirtilmektedir.

Nitrat indirgeme testinde, test bakterileri nitrat (N03 ^- ) içeren bir et suyu ortamında büyütülür. Bakteriler nitratları azaltma yeteneğine sahipse, et suyu, sülfanilik asit ve bir-naftilamin ilavesi üzerine kırmızı bir renk alır.

Kırmızı renk üretilmezse, ya N03 ^- hiç bakteri tarafından azalmaz ya da bakteriler, N03 ^- N3 ^- NH3 ve N2 değerlerinin ötesinde hızla azaltan yüksek güçlü nitrat redüktaz enzimi üretir. Bunu onaylamak için, az miktarda çinko tozu eklenir ve bu, ortam içinde mevcutsa N02 ^{- 'yi} azaltır, böylece kırmızı renk verir.

Bu nedenle, kırmızı renk üretilirse, N03 ^- 'ün değişmemiş ortamda bulunduğunu ve bakterilerin nitratları azaltma yeteneğine sahip olmadığını gösterir. Eğer kırmızı renk üretilmezse, N03 ^- 'ün N02' nin NH3 ve N2 'ye düşürüldüğünü ve bakterilerin nitratları azaltma yeteneğine sahip olduğunu gösterir.

Gerekli malzemeler:

Test tüpleri, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama döngüsü, otoklav, bunsen brülör, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, nitrat suyu, çinko tozu, nitrat reaktif çözeltisi A, nitrat reaktifi B çözeltisi, izole koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. Nitrat et suyu besiyeri (ana bileşen olarak nitrat içeren) veya 100 ml et suyu için gereken hazır tozu, çalkalanarak ve döndürülerek 250 ml'lik bir konik şişe içinde 100 ml damıtılmış su içinde tartılır ve eritilir (1). Şekil 7.10).

2. pH değeri bir pH kağıdı veya pH ölçer kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak 7.2'ye veya daha az ise 0.1 N NaOH kullanılarak 7.2'ye ayarlanır. Şişe, gerekirse bileşenleri tamamen çözmek için ısıtılır.

3. Et suyu beş adet test tüpüne dağıtılır (her biri yaklaşık 10 ml), pamuk tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlı.

4. Et suyu tüpleri 121 ° C'de (15 psi basınç) 15 dakika otoklavda sterilize edilir.

5. Et suyu tüplerinin oda sıcaklığına soğumasına izin verilir.

6. Test bakterileri, aseptik olarak, tercihen bir laminer akış odasında, bunsen alevi üzerinde sterilize edilmiş bir aşılama döngüsünün yardımı ile et suyuna aşılanır. Her aşılamadan sonra döngü sterilize edilir.

7. Aşılanmış et suyu tüpleri, bir inkübatörde 48 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edilir.

8. Herbir test tüpüne nitrat reaktif Solüsyonu A'nın (sulfanilik asit içeren) ve nitrat reaktif Solüsyonu B'nin (a-naftilamin içeren) her birinin 0.5 ml'si eklenir, iyice çalkalanır ve 15 dakika sonra renk değişimi gözlenir.