Jelatinaz Üreterek Hidrolize Jelatin Yeteneklerini Bulmak İçin Bakterilerde Oksidaz Testi

Jelatinaz Üreterek Hidrolize Jelatin Yeteneklerini Bulmak İçin Bakterilerde Oksidaz Testi!

Prensip:

Bazı bakteriler, proteolitik enzim 'jelatinaz' üretebildiklerinden jelatini hidrolize etme kabiliyetine sahiptir.

Jelatin, yarı saydamlık üreten cıva klorür ile çökeltilirken, hidrolize olan son ürünleri, saydamlık üretmeyen, bunun için saydamlık üreten cıva klorür ile çökelmez.

Jelatinleştirme testinde, test bakterileri jelatin içeren agar plakaları üzerinde büyütülür. Bakterilerin kolonileri göründükten sonra, plakalar bir cıva klorür çözeltisi ile sulandırılır. Bakteriler jelatini hidrolize etme kabiliyetine sahipse, kolonileri jelatini çevreleyen alanlarda ortam içinde hidrolize ederken, plakaların kalan kısımları hidrolize olmamış jelatini tutar.

Sonuç olarak, bir cıva klorür çözeltisi ile sulandırıldığında, etraflarında oluşan hidrolize ürünler cıva klorür ile çökeltiler oluşturmadığından koloniler çevresinde şeffaf saydam bölgeler oluşur. Öte yandan, bu alanlardaki hidrolize olmamış jelatin cıva klorür ile çökeltildiğinden, plakaların kalan bölümlerinin yarı saydam hale gelmesidir.

Gerekli malzemeler:

Petri kapları, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama halkası, otoklav, bunsen yakıcı, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, Fraizer jelatin ağarı, cıva klorür çözeltisi, izole koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. İki petri kabı temizlenir, kağıtla kaplanır ve iplik veya lastik bantla bağlanır (Şekil 7.20). Bu adım ve 6. adımda petri kaplarının sterilizasyonu, eğer fırında sterilize edilmiş petri kapları doğrudan kullanılıyorsa, atlanır.

2. Fraizer'in jelatin agar besiyerinin bileşenleri (ana bileşen olarak jelatin içeren) veya 100 ml besiyeri için gereken hazır tozu tartılır ve çalkalanarak ve döndürülerek 250 ml'lik bir konik şişede 100 ml damıtılmış su içinde çözülür. .

3. pH değeri, bir pH kağıdı veya pH metre kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak veya daha azsa 0.1N NaOH kullanılarak 7.2'ye ayarlanır.

4. Şişe, agarı ortam içinde tamamen çözmek için ısıtılır.

5. Şişe pamuk tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlanmış.

6. İki petri kabı ve Fraizer'in jelatin agar besiyerini içeren konik şişesi, bir otoklavda 15 dakika boyunca 121 ° C'de (15 psi basınç) sterilize edilir.

7. Sterilizasyondan sonra, otoklavdan çıkarılır ve ortamın katılaşmasına izin vermeden bir süre soğumaya bırakılır. Ortamın soğutulması plakaların içinde su damlacıklarının yoğunlaşmasını ve birikmesini önler. Ortam, depolama sırasında önceden hazırlanmış ve katılaşmışsa, tamamen eriyene kadar dikkatlice ısıtılarak sıvılaştırılmalıdır.

8. Jelatin agar plakaları hazırlamak için, sterilize edilmiş Frazier'in jelatin agar besiyeri soğumadan ve katılaşmadan önce, sıcak erimiş durumda, aseptik olarak, tercihen bir laminer akış odasının içine, iki sterilize edilmiş petri kabına (her biri yaklaşık 20 ml) dökülür. erimiş besiyeri petri kabının tabanını tamamen kaplar.

Sonra, plakalar kapaklarıyla kapatılır ve içindeki ortamı katılaştırmak için soğumaya bırakılır. Plakaların ve kapakların iç yüzeyinde yoğunlaşabilen su buharı, plakaları ve kapakları ters bir konumda bir inkübatörde 37 ° C'de yaklaşık 1 saat tutularak buharlaştırılır.

9. Her plaka alt tarafta dörtte üçü olarak işaretlenmiştir.

10. Test bakterilerinin "spot inokülasyonu", alevle sterilize edilmiş bir ilmek yardımı ile bakterilerin bir spotunu (veya küçük bir lekesini) yaparak her çeyreğin ortasındaki aseptik olarak, tercihen laminer bir akış odasının içinde yapılır. Her aşılamadan sonra döngü sterilize edilir.

11. Aşılanmış plakalar, bakteri kolonileri görünene kadar inkübatörde, yukarıdan aşağıya, 37 ° C'de 24 ila 48 saat boyunca bir inkübatörde inkübe edilir.

12. Plakalar, cıva klorür çözeltisi (HgCl2) ile sulandırılmıştır.