Bakterilerin Yetiştirilmesi Gereklilikleri (Bol Besinler ve Optimum Çevre Koşulları)

Bakteri yetiştiriciliği için temel gereksinimler şunlardır: (I) Bol Besinler (II) Optimum Çevre Koşulları

Bakteriler evrensel olarak hemen hemen her yerde bulunur; Toprakta, havada, suda ve hatta tüm hayvanların ağzında ve bağırsaklarında. 'Bakterilerin ekimi' veya 'bakteri kültürü', bu küçük görünmez bakterilerin, besleyici açıdan zengin maddelerden ve hızlı büyüme ve çoğalmalarını destekleyen uygun çevre koşullarında büyütülmesi anlamına gelir.

Bu durum, çıplak gözle görülebilen geniş popülasyon (koloni veya bulanık süspansiyon olarak) olarak tezahür etmeleriyle sonuçlanır. Bu nedenle, (I) Bol besinler ve (II) Optimum çevre koşulları gibi bakteri yetiştiriciliği için iki temel gereksinim vardır.

(I) Bol Besinler:

Doğada, bakteriler, salgıladıkları enzimler tarafından daha basit formlara parçalandıktan sonra etraflarında bulunan karmaşık besinleri alırlar. Ancak laboratuvarda, basit formda besinler içeren maddelerde yetiştirilerek hızlı büyüme arttırılır.

Hızlı büyümesi ve bakteri çoğalması için basit formlarda yeterli miktarda besin içeren bu maddelere 'kültür ortamı' denir. Farklı içerikler içeren bir dizi kültür ortamı var. Kültür ortamı aşağıdaki üç 'fiziksel biçimde' elde edilir.

1. Sıvı Ortam veya Et suyu:

Bunlar, otoklavda sterilize edilmiş bakterilerin büyümesi için daha basit formlarda su ve besinler içeren berrak sıvılardır. Bakteriler kendilerine aşılandığında ve büyümelerine uygun koşullarda inkübe edildiklerinde, ortamın bulanık hale gelmesinden dolayı, yoğun bir şekilde bakteri hücrelerinin kalın süspansiyonlarına dönüşürler.

2. Katı Ortam:

Bunlar, sıvı et suyunun 'agar' adı verilen bir katılaştırıcı madde ile% 1'den daha fazla bir seviyede takviye edildiği katılaşmış maddelerdir. Ağar, deniz yosunlarından çıkarılan bir tozdur (bazen agar olarak adlandırılır) ve esas olarak galaktozdan oluşan kompleks bir karbonhidrattır.

Şunu vurgulamakta yarar var; agar katılaşıcı bir maddedir ve bakteri için besin değeri yoktur. Sulu çözeltide olduğu gibi 100 ° C'de sıvılaştığında ve 40 ° C'de katılaştığında mükemmel bir katılaştırıcı madde olarak işlev görür. İnsanın patojenik bakterilerinin çoğu 37 ° C'de (normal insan vücudu sıcaklığı) yetiştirilir.

Agar bu sıcaklıkta erimez ve sert bir yüzey sağlar. Bu besleyici yönden zengin sert yüzeyde, her bir bakteri büyür, çoğalır ve bu bakterilerin izole edilmiş bir kolonisine neden olur. Bu izolasyon, bakterilerin süspansiyon halinde büyüdüğü sıvı ortamda mümkün değildir.

Katı agar ortamı aşağıdaki formlarda hazırlanabilir:

(a) Agar Plakaları:

Ağar tozu, % 1'den daha fazla bir seviyede, ısıtma yoluyla sıvı et suyunda tamamen çözülür. Daha sonra otoklavda sterilize edilir. Sıcak halde sıvı halde kalır ve soğudukça katılaşır. Sıcak sıvı halde, sterilize edilmiş petri kabı (her bir petri kabında 20 mi) içine dökülür ve soğumaya bırakılır, böylece petri kabının dibinde kalın bir tabaka oluşturur.

Kalın bir katılaşmış agar ortamı tabakası içeren bu petri kaplarına "agar plakaları" veya basitçe "plakalar" denir. Bakteriler, numaralandırma ve izolasyonları için bu plakalarda izole edilmiş koloniler halinde büyütülür.

Bu kolonilerin özellikleri ayrıca bakterilerin tanımlanmasına yardımcı olur. Petri kapları, farklı deney koşullarını karşılamak için farklı boyutlarda mevcuttur. Bununla birlikte rutin amaçlar için, 15 cm çapında petri kapları kullanılır.

(b) Agar Eğimli:

'Agar slant'larını veya basitçe' slant'larını hazırlamak için, agar tozu, % 1'den daha fazla bir seviyede, tamamen ısınmak suretiyle sıvı et suyunda çözülür. Sıcak sıvı halde, test tüplerine dağıtılır (her test tüpünde 20 ml), pamuk tıkalı ve otoklavda sterilize edilir.

Test tüplerindeki sterilize edilmiş besiyeri, çekiklerin elde edilmesi için çekik pozisyonda katılaşmaya bırakılır. Eğikler, agar plakaları üzerinde izole edilerek elde edilen bakteri saf stok kültürlerinin bakımı için kullanılır.

Bunlar aynı zamanda uluslararası standart laboratuvarlardan elde edilen standart referans stok kültürlerinin bakımı için kullanılır. Saf kültürler ve standart kültürler, düzenli olarak (genellikle 15 gün ila 1 ay arasında) aseptik olarak taze meyvelere aktarılarak korunur. Eğiklerde büyüme özellikleri de bakterilerin tanımlanmasında yardımcı olur.

(c) Agar Derin Tüpler:

Agar derin tüpleri, agar slantlarının hazırlanmasında takip edilenle aynı prosedürü izleyerek hazırlanır, ancak burada ortam sterilize edildikten sonra dik konumda katılaşmaya bırakılır. Bunlar öncelikle bakterilerin gaz halindeki gereksinimlerini incelemek için kullanılır.

3. Yarı Katı Ortam:

% 1'den az bir seviyede agar içerirler, böylece yarı katı halde kalırlar. Özel çalışmalar için kullanılırlar.

(II) Optimum Çevre Koşulları:

Çeşitli çevresel koşullar bakteri üremesini etkiler. Bir bakteri yetiştirmek için, bir dizi optimum çevresel koşullar sağlanmalıdır. Bakteri yetiştiriciliği sırasında sağlanacak en önemli çevresel koşullar aşağıda verilmiştir.

1. Ortamın pH'ı:

Her bakteri türü belirli bir pH aralığında büyüyebilir. Çoğu bakteri için bu aralık 4 ila 9 arasındadır. Ancak, her bakteri türünün maksimum büyümesi çok dar bir pH aralığında gerçekleşir. Çoğu bakteri için bu optimum pH aralığı 6.5-7.5'tir ve mantarların çoğu için, küfler ve mayalar asidik ortamları tercih ettiklerinden 4-6'dır.

Maksimum büyümenin gerçekleşmesi için, kültür ortamının pH'sının hazırlanması sırasında bu pH'a ayarlanması gerekir. Tampon görevi gören kimyasal maddeler (örneğin KH ₂ P0 ₄, K ₂ HP0 ₄ ) ayrıca, bakteriler tarafından büyümeleri sırasında üretilen asidik veya bazik metabolik son ürünlerin birikmesinden dolayı oluşabilecek pH'da herhangi bir kaymayı önlemek için ortama eklenir. .

2. Kuluçka Sıcaklığı:

Mezofiller 37 ° C'de, 55 ° C'de termofiller ve 4 ° C'de psişrofiller kuluçkaya bırakılır.