Bakteriyel Spor ve Vejetatif Hücreyi Farklılaştırmak için Bakterilerin Sporla Boyanması

Amaç:

Çevresel koşullar normal metabolik aktiviteleri için uygunsa, tüm bakteriler 'bitkisel formlarında' kalırlar.

Bu formda besinleri alırlar, büyürler ve ürerlerler.

Diğer taraftan, şiddetli soğuk, aşırı sıcak, yaşlanma, besin eksikliği, radyasyona maruz kalma ve toksik kimyasallar gibi çevresel koşullar tersine döndüğünde, çoğu ölüyor.

Bununla birlikte, az sayıda bakteri türü, bu tür olumsuz koşullar altında, kendilerini "sporlar" olarak adlandırılan yüksek dirençli, metabolik olarak aktif olmayan formlara değiştirerek hayatta kalabilir. Olumsuz koşullarda, bitkisel bir hücre içinde dehidrasyon ve hücre içeriğinin daralması ile bir spor üretilir.

Bakteriler hücresinde oluşan bu spor “endospor” olarak adlandırılır (Şekil 2.13). Olumsuz koşullar kötüleşirse, hücre, şimdi 'spor' adı verilen bağımsız bir uykuda hücre haline gelen endosporu serbest bırakarak kırılır.

Spor oluşumu sürecine 'sporogenez' denir. Spor, hücreyi herhangi bir fiziksel hasara karşı koruyan, spor korteks ve spor ceket gibi kalın, nispeten geçirimsiz katmanlara sahiptir. Spor, henüz açık bir şekilde açıklanmayan birkaç mekanizma ile direncini arttırır.

Koşullar uygun hale geldiğinde, spor yırtılmasını ve sporu örten tabakalar metabolik olarak aktif bir vejetatif hücreye yol açar. Bu işleme 'çimlenme' denir.

Böylece, spor oluşturma yeteneğine dayanarak, bakteriler aşağıdaki gibi iki gruba ayrılabilir:

(1) Spor oluşturan bakteriler (Spor yapanlar):

Olumsuz çevresel koşullar altında hayatta kalmak için bir spor üretebilen bir bakteri bir spor oluşturan bakteridir (spor yapan). Çoğunlukla, aşağıdaki üç cins çubuk şeklindeki bakteri, olumsuz çevresel koşullar altında sporlar üretebilir.

A. Aerobik çubuk şeklindeki bakteriler

1. Bacillus spp.

B. Anaerobik çubuk şeklindeki bakteriler

2. Clostridium spp.

3. Desulfotomaculum spp.

(2) Spor yapmayan bakteriler (Spor yapmayanlar):

Bir spor üretemeyen ve bu nedenle, olumsuz çevresel koşullar altında vejetatif formunda ölen bir bakteri, spor oluşturucu olmayan bir bakteridir (spor yapmayan).

Spor boyama işleminin amacı bir sporcunun sporlarını ve vejetatif hücrelerini ayırt etmek ve spor oluşturucuları spor oluşturucu olmayanlardan ayırmaktır. Spor boyama, aynı zamanda Bacillus, Clostridium ve Desulfotomaculum cinsine ait bakterilerin tanımlanmasında da yardımcıdır.

Prensip:

Sporlar, etraflarında kalın, nispeten geçirimsiz katmanlara sahip oldukları vejetatif hücrelerden farklıdır (Şekil 2.14). Birincil leke, malakit yeşili, bu katmanlardan sporların içine giremez.

Bu nedenle, primer lekenin penetrasyonu, onu kaplama katmanlarından spor protoplasta süren ısı uygulamasıyla arttırılır. Şimdi, sporlar yeşil görünür. Sporlar renklendirme ajanı ile muamele edildiğinde, musluk suyu, suyu dışladıkları için renklendirme işlemine maruz kalmazlar.

Musluk suyu, sadece sporların çevresinde bulunan fazlalık birincil lekeyi çıkarır. Böylece sporlar yeşil rengi korur. Daha sonra, safranin ile karşı lekelendiğinde, safranin molekülleri, kaplama katmanlarından sporlara giremez. Böylece, nihayet sporlar birincil lekenin yeşil rengini korur ve yeşil görünür.

Öte yandan, bitkisel bakteri hücreleri, malakit yeşili, birincil lekeyi kolayca alır, fakat leke, musluk suyu altında renklendirildiğinde uzaklaştırıldığı, bitkisel hücre bileşenleri için güçlü bir afiniteye sahip değildir.

Şimdi, vejetatif hücreler renksiz görünür. Safranin ile karşı lekelendiğinde, renksiz vejetatif hücreler, lekeyi alır ve yeşil görünen sporların aksine kırmızı görünür.

Gerekli malzemeler:

Kayma, ilmek, malakit yeşili, safranin, spor oluşturan bakteri, sıcak plaka, mikroskop, daldırma yağı.

Prosedür:

1. Bir musluk, musluk suyu altında düzgün bir şekilde temizlenir, böylece su, yüzeyinde damla olarak kalmaz.

2. Yapışma suyu, bibulöz kağıt ile silinir ve kızak havada kurutulur.

3. Bir slayt merkezinde, aşağıda verilen iki yöntemde, spor oluşturan bakterilerin bir lekesi yapılır.

(A) Ağar plakasında veya ağar eğimli bir alanda yetişen spor gözlenecek olursa, lamın ortasına bir damla su konur. Alev üzerinde bir ilmek sterilize edilir ve Clostridium supergenes veya Bacillus subtilis gibi yaşlanmış bir plaka veya eğik kültürden (48-72 saat eski) bir spor-spost-Clostridium bakteri döngüsü su damlasına aktarılır.

Daha sonra, su damlasındaki ilmeğin hafifçe döndürülmesiyle, bir bakteri süspansiyonu yapılır ve damla, bir smear elde edilinceye kadar yayılır. Plaka veya eğimli kültürlerde spor oluşturan bakteri yaşı arttıkça sporlar oluşturur.

(B) Eğer sıvı et suyu içinde yetişen sporcunun gözlenmesi halinde, sadece vejetatif hücreleri içeren et suyu kültürü, 15 dakika boyunca bir su banyosunda ısıtılarak, ısı stresine maruz bırakılır, böylece bitkisel bitkilerin bir kısmı Isı stresi. Et suyu kültüründen gelen karışık spor-vejetatif hücre süspansiyonunun bir damlası, steril bir ilmekle doğrudan lamın ortasına yerleştirilir ve yayılarak bir leke yapılır.

4. Leke havada kurutulur.

5. Leke ısıtma ile sabitlenir. Isıtma, hücrelerin kayma yüzeyine yapışması ve boyama sırasında yıkanmaması nedeniyle hücresel proteinlerin pıhtılaşmasına neden olur. Isı sabitlemesi, sürgünün bir alev üzerinde yüksek hızla sürülmesi ile smear ile hızlı bir şekilde yapılır. yüzey yukarı bakacak şekilde, böylece smear ısınmaz.

6. Yayma, leke, malakit yeşili ile kaplanmıştır.

7. Kızak, ılık bir sıcak plaka üzerinde tutulur ve preparasyon 2-3 dakika boyunca buharda bırakılır. Sıcak levhanın sıcaklığı öyle ayarlanmıştır ki preparat kaynamaya ve hızla buharlaşmayacaktır. Buharlaşma kaybı, lekenin kurumaması için tekrar doldurulur.

8. Kızak, sıcak plakadan çıkarılır ve soğutulur.

9. Leke, yavaşça akan musluk suyu altında yıkanarak renklendirilir, bu şekilde su, doğrudan smear üzerine düşmez.

10. Leke, leke, safranin ile 30 saniye boyunca sular altında kalır.

11. Aşırı karşı leke, akan sudan doğrudan akan suya düşmeyecek şekilde, hafifçe akan musluk suyu altında bulaşıktan tamamen uzaklaşır.

12. Sürgü, kalın bir kağıt ile kuru olarak lekelenir.

13. Lam, mikroskop aşamasına tutturulur ve smear, düşük güç ve yüksek kuru amaçlar altında gözlenir.

14. Leke üzerine bir damla daldırma yağı konur.

15. Leke, yağa batırma hedefi altında gözlenir.