Hidroliz Nişastalarını Yeteneklerini Bulmak İçin Bakteriler Üzerinde Nişasta Hidroliz Testi

Nişasta Hidrolizi Hidroliz Nişastası Yeteneklerini Bulmak İçin Bakteriler Üzerinde Test Etme!

Prensip:

Bazı bakteriler sakkarolitik enzimi üretebildiği için nişastayı hidrolize etme kabiliyetine sahiptir.

Nişasta, iyot ile koyu mavi renk oluştururken, hidrolize son ürünleri iyot ile böyle koyu mavi renk elde etmez.

Nişasta hidroliz testinde, test bakterileri nişasta içeren agar plakalar üzerinde büyütülür. Bakterilerin kolonileri göründükten sonra, plakalar iyot çözeltisi ile sulandırılır. Bakteriler nişastayı hidrolize etme kabiliyetine sahipse, kolonileri nişastayı çevreleyen alanlarda ortam içinde hidrolize ederken, plakaların geri kalan kısımları hidrolize edilmemiş nişasta içerir.

Sonuç olarak, iyot çözeltisiyle sulandırıldığında koloniler etrafında saydam berrak bölgeler oluşur, çünkü etraflarında oluşan hidrolize ürünler iyotla koyu mavi renk oluşturmazlar. Diğer taraftan, iyot bu alanlarda hidrolize edilmemiş nişasta ile koyu mavi renk oluşturduğundan, plakaların geri kalan kısımlarının koyu mavi olması sağlanmıştır.

Gerekli malzemeler:

Petri kapları, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama döngüsü, otoklav, bunsen brülörü, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, nişasta agarı, Lugol iyot çözeltisi, izole koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. İki petri kabı temizlenir, kağıtla kaplanır ve iplik veya lastik bantla bağlanır (Şekil 7.21). Bu adım ve ayrıca 6. adımda petri kaplarının sterilizasyonu, eğer fırında sterilize edilmiş petri kaplarının doğrudan kullanılması durumunda atlanır.

2. Nişasta agar besiyerinin bileşenleri (ana bileşen olarak nişasta içerir) veya 100 ml besiyeri için gereken hazır tozu tartılır ve çalkalanarak ve döndürülerek 250 ml'lik bir konik şişede 100 ml damıtılmış su içinde çözülür.

3. pH değeri, bir pH kağıdı veya pH metre kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak veya daha azsa 0.1N NaOH kullanılarak 7.2'ye ayarlanır.

4. Şişe, agarı ortam içinde tamamen çözmek için ısıtılır.

5. Şişe pamuk tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlanmış.

6. İki petri kabı ve nişasta agar ortamı içeren konik şişesi, bir otoklavda 15 dakika boyunca 121 ° C'de (15 psi basınç) sterilize edilir.

7. Sterilizasyondan sonra, otoklavdan çıkarılır ve ortamın katılaşmasına izin vermeden bir süre soğumaya bırakılır. Ortamın soğutulması plakaların içinde su damlacıklarının yoğunlaşmasını ve birikmesini önler. Ortam, depolama sırasında önceden hazırlanmış ve katılaşmışsa, tamamen eriyene kadar dikkatlice ısıtılarak sıvılaştırılmalıdır.

8. Nişasta agar plakalarının hazırlanması için, sterilize edilmiş nişasta agar besiyeri soğumadan ve katılaşmadan önce, ılık ve sıcak bir halde, aseptik olarak, tercihen bir laminer akış odasının içine, iki sterilize edilmiş petri kabına (her biri yaklaşık 20 ml) dökülür. erimiş ortam, petri kabının tabanını tamamen kaplar.

Daha sonra, plakalar kapaklarıyla kapatılır ve içindeki ortamı katılaştırmak için soğumaya bırakılır. Plakaların ve kapakların iç yüzeyinde yoğunlaşabilen su buharı, plakaları ve kapaklarını bir inkübatörde 37 ° C'de yaklaşık 1 saat boyunca ters bir konumda tutmak suretiyle buharlaştırılır.

9. Her plaka alt tarafta dörtte üçü olarak işaretlenmiştir.

10. Test bakterilerinin "spot inokülasyonu", alevle sterilize edilmiş bir ilmek yardımı ile bakterilerin bir spotunu (veya küçük bir lekesini) yaparak her çeyreğin ortasındaki aseptik olarak, tercihen laminer bir akış odasının içinde yapılır. Her aşılamadan sonra döngü sterilize edilir.

11. Aşılanmış plakalar, bakteri kolonileri görünene kadar inkübatörde, yukarıdan aşağıya, 37 ° C'de 24 ila 48 saat boyunca bir inkübatörde inkübe edilir.

12. Plakalar, Lugol'ün iyot çözeltisi ile sulandırıldı.