Hidrojen Sülfit Üretme Yeteneğini Bulmak İçin Bakteriler Üzerinde Üçlü Şeker Demir Testi (Şekil ile)

Üçlü şeker hakkında bilgi edinmek için Hidrojen Sülfür Üretme Yeteneğini Bulmak İçin Bakterilerde Demir Testi!

Bir bakteri glikoz, sukroz ve laktoz gibi üç şekerden herhangi birini veya daha fazlasını kullanma ve hidrojen sülfit üretme yeteneğini (H2 S), bu demir azaltır.

Prensip:

Bazı bakteriler glukoz, sukroz ve laktoz gibi üç şekerden birini veya daha fazlasını kullanma yeteneğine sahiptir.

Üç şekerden herhangi birinin veya daha fazlasının (üçlü şekerler) kullanılması durumunda, fenol kırmızısının rengini kırmızıdan sarıya değiştiren pH'ı düşüren asit üretilir.

Ayrıca, bazı bakteriler sülfür bileşikleri kullanarak hidrojen sülfür (H2S) üretme kabiliyetine sahiptir. Bu şekilde üretilen H2S, demir sülfitin siyah çökeltilerini oluşturmak için demir bileşiği, demir sülfat ile birleşir.

Üçlü şeker demiri testinde (TSI testi), test bakterileri glukoz, sukroz, laktoz, fenol kırmızısı, sodyum tiyosülfat ve demir sülfat içeren agar slantlarında büyütülür. Ortam% 0.1'lik düşük bir konsantrasyonda glikoz (yani D-glikoz veya dekstroz) içermekle birlikte, sukroz ve laktoz konsantrasyonu% 1'de yüksek tutulur.

Bakteriler, üç şekerden herhangi birini veya daha fazlasını kullanma yeteneğine sahipse, ortamın rengi kırmızıdan sarıya değişir. Bakteriler H2S üretme yeteneğine sahipse, ortam siyah renk alır. Ortamda üç şeker ve bir demir bileşiği kullanıldığı için, teste üçlü şeker demir testi denir.

Gerekli malzemeler:

Test tüpleri, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama iğnesi, otoklav, bunsen burner, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, üçlü şeker demir (TSI) agarı, izole koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. TSI agar besiyerinin içerikleri (ana bileşenleri olarak 3 şekeri ve demiri içeren) veya 100 ml besiyeri için gereken hazır tozu tartılarak 100 ml damıtılmış su içinde 250 ml'lik bir konik şişe içinde tartılır ve eritilir. Çalkalama ve döndürme (Şekil 7.7).

2. pH değeri, bir pH kağıdı veya pH ölçer kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak veya daha azsa 0.1N NaOH kullanılarak 7.4'e ayarlanır.

3. Şişe, agarı ortam içinde tamamen çözmek için ısıtılır.

4. Katılaşmadan önce, sıcak erimiş haldeki ortam 5 test tüpüne (her biri yaklaşık 20 mi) dağıtılır.

5. Test tüpleri koton tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlanmış.

6. Bir otoklavda 121 ° C'de (15 psi basınç) 15 dakika sterilize edilirler.

7. Sterilizasyon sonrasında, otoklavdan çıkarılır ve ortamın soğutulması ve katılaştırılması için TSI agar slantlarının elde edilmesi için meyilli bir pozisyonda tutulur.

8. Test bakterileri, aseptik olarak, tercihen laminer bir akış odasında, alın içine bıçaklanarak ve alevle sterilize edilmiş bir iğne yardımı ile çekiklerin yüzeyinde çizik yapılarak eğiklere aşılanır. İğne her aşılamadan sonra sterilize edilir.

9. Aşılanan slantlar, bir inkübatörde 24 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edilir.

Gözlemler:

1. Gaz üretimi olan veya olmayan sarı popo ve kırmızı eğimli (agar poposundaki kırılmalar):

Asit popo ve alkali eğri oluşmuştur. Burada yalnızca glikoz anaerobik olarak (fermentatif olarak) popo asidik (sarı) yapmak için kullanılmıştır. Başka bir şeker kullanılmamıştır. Glikoz konsantrasyonu daha az olduğu için (% 0.1), eğimli yüzeyde üretilen az miktarda asit, onu alkalin (kırmızı) yaparak hızlı bir şekilde oksitlenir.

Ayrıca, ortam içinde bulunan peptonun oksidatif hakimiyeti, eğimli alkalini (kırmızı) yapan NH _Y üretir. Bununla birlikte, popoda, asit durumu düşük oksijen mevcudiyeti ve bakterilerin daha yavaş büyümesi nedeniyle korunur. Dolayısıyla, bakteriler glukoz pozitiftir.

2. Gaz üretimi olan veya olmayan sarı popo ve sarı eğimli:

Asit popo ve asit eğrisi oluşmuştur. Burada laktoz ve / veya sakaroz fermente edilmiştir. Ortamdaki konsantrasyonları yüksek olduğu için asidik eğimli ve asitli popo ile sonuçlanan yüksek miktarda asit üretirler ve asidik durumu korurlar. Bu nedenle bakteri sukroz / laktoz pozitiftir.

3. Kırmızı popo ve kırmızı eğimli:

Üç şekerin hiçbiri fermente edilmedi. Bunun yerine, peptonlar anaerobik ve / veya aerobik koşullar altında katabolize edilmiştir, bu da amonyak üretimine bağlı olarak bir alkali duruma neden olmaktadır.

Peptonların yalnızca aerobik bozunması meydana gelirse, sadece eğimli yüzey alkali (kırmızı) olur. Peptonun aerobik ve anaerobik bozunması durumunda, hem eğimli hem de popo alkali (kırmızı) olur. Dolayısıyla, bakteriler şeker negatifdir.

4. Popo kararması:

Yukarıdaki koşullardan herhangi birine ek olarak, popo karartması meydana gelirse, bakterinin ortamda bulunan inorganik kükürt (sodyum tiyosülfat) kullanarak H2S üretebildiğini gösterir.

H2S, ortamdaki kara renginde bir değişikliğe yol açan siyah demir sülfür çökeltileri oluşturmak için ortamdaki demir sülfatla birleşir. Böylece, bakteriler H2S pozitif.

5. Popo kararması yok:

Bakteriler, ortamda bulunan inorganik kükürt (sodyum tiyosülfat) kullanarak H2S üretemez. Böylece, bakteriler H2S negatifdir.