Voges-Proskauer Glukoz Kullanma Yeteneklerini Bulmak İçin Bakteriler Üzerinde Deney Yapma

Asetilmetilkarbinol üretimi ile glikoz kullanma kabiliyetlerini öğrenmek için bakterilerdeki Voges-Proskauer testi (VP testi) hakkında bilgi edinmek için bu makaleyi okuyun!

Prensip:

Bazı bakteriler glikoz kullanma ve onu nötr bir son ürün olan asetilmetilkarbinol (asetoin) 'e çevirme kabiliyetine sahiptir.

Bu bakteriler başlangıçta glikozu, metabolik ara asetik asit ile asetilmetilkarbinol (asetoin) ve C2 'ye' butilen glikol yolu 'yoluyla metabolize edilen piruvik aside metabolize eder.

Asetilmetilkarbinol, alkali koşullar altında (yüzde 40 KOH) bir naftol varlığında diasetil için oksitlenir. Diasetil, gül pembesi rengini üretmek için guanidin grubu kreatinin (kültür ortamında kullanılan peptondan) ile reaksiyona girer.

Voges-Proskauer testinde (VP testi), test bakterileri glikoz içeren bir et suyu ortamında büyütülür. Bakteriler, nötr son ürün olarak asetilmetilkarbinol (asetoin) üretimi ile glikoz kullanma kabiliyetine sahipse, et suyu, bir naftol çözeltisi ve ardından% 40 KOH eklendikten sonra gül pembesi bir renk elde eder.

Gerekli malzemeler:

Test tüpleri, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama döngüsü, otoklav, bunsen brülör, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, MR-VP suyu (veya glukoz fosfat suyu), VP çözeltisi I (Barritt'in reaktif çözeltisi A) ve VP çözeltisi II (Barritt'in reaktif çözeltisi B), izole edilmiş koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. MR-VP broth besiyerinin (ana bileşen olarak glikoz içeren) veya 100 ml besi için gerekli hazır tozunun içerikleri çalkalanarak 250 ml konik bir şişede 100 ml damıtılmış su içinde tartılır ve çözülür. dönen (Şekil 7.5). Metil kırmızısı testi için kullanılan et suyu da burada kullanılabilir. Genellikle aynı suyu, her iki testte (MR ve VP) aynı anda kullanılır.

2. pH değeri bir pH kağıdı veya pH ölçer kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak 6.9'a veya daha azsa 0.1N NaOH kullanılarak 6.9'a ayarlanır. Şişe, gerekirse bileşenleri tamamen çözmek için ısıtılır.

3. Et suyu beş adet test tüpüne dağıtılır (her biri yaklaşık 10 ml), pamuk tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlı.

4. Et suyu tüpleri 121 ° C'de (15 psi basınç) 15 dakika otoklavda sterilize edilir.

5. Et suyu tüplerinin oda sıcaklığına soğumasına izin verilir.

6. Test bakterileri, aseptik olarak, tercihen bir laminer akış odasında, bunsen alevi üzerinde sterilize edilmiş bir aşılama döngüsünün yardımı ile et suyu içine aşılanır. Her aşılamadan sonra döngü sterilize edilir.

7. Aşılanmış et suyu tüpleri, bir inkübatörde 37 ° C'de 48 ila 72 saat inkübe edilir.

8. VP çözeltisi I (a-naftol içeren), et suyu tüplerine (her biri 0.2 mi) bırakılır ve iyice karıştırılır.

9. VP çözeltisi II (KOH içeren) et suyu tüplerine (her biri 0.6 ml) bırakılır, iyice karıştırılır ve 30 dakika ila 2 saat bekletilir.