Balıklarda Gamet Kriyoprezervasyonu

Bu yazıda balıkların balıklarda dondurulmasının korunması hakkında tartışacağız.

Kriyoprezervasyon pratikte zaman kısıtlaması olmayan bir depolama tekniğidir. Balık teknelerinin korunumu bu teknikle denenmiştir. Spermlerin dondurulması hayvancılıkta iyi bilinen bir prosedürdür.

Şimdi dondurulmuş spermler, sığır, at, domuz, koyun ve kanatlı hayvan yetiştiriciliğinde tohumlamada başarıyla kullanılmaktadır. Bu teknolojinin balıkların spermlerinin, yumurtalarının ve embriyolarının korunmasına aktarılması için büyük çaba sarf edildiğini belirtmek ilginçtir.

Bu teknik balık yetiştiricilere aşağıdaki şekillerde yardımcı olacaktır:

(1) Sperm veya yumurtaların depoda tutulması durumunda, kadın ve erkeğin tesadüfî olmayan olgunlaşma sorunu aşılabilir.

(2) Yerli stoğu iyileştirecek ve üçüncü dünyanın yerli türlerini yetiştirmesine ve üstün sapların özel suşları üretmesine yardımcı olacak seçici ıslah programı başlatılabilir.

(3) Gametlerin dondurularak korunma tekniği, yerli Hint balıklarının çoğu egzotik balıklarla rekabet edemediğinden, yerli germplazmanın korunmasında önemli bir rol oynayacaktır. Bu teknikle, tehdit altındaki türlerden gelen gametler, çevresel bozulmaların neden olduğu azalan genetik çeşitliliğe karşı bir koruma olarak bankalıdır.

(4) Tek cinsiyetli kültür üretimine yardımcı olabilir.

(5) Eğer gametler başarılı bir şekilde korunabiliyorsa, yıl boyunca ihtiyacımıza göre balık geliştirebiliriz ve popülasyonun genetik özgünlüğünü korumak için gen bankasının kurulmasına yardımcı olabilir ve hayatta kalma için genel koşullar iyileştiğinde yeniden giriş için hazır bulundurmalarını sağlayabiliriz.

Spermler, yumurtalar ve embriyolar dondurulabilir, ancak yumurta ve embriyoların korunması, spermatozoaya kıyasla büyük boyutlarından dolayı bu hücrelerde yeterince emilebilecek kriyoprotektanın bulunamaması nedeniyle zordur.

Balıklarda spermatozoanın dondurulması insanda başarılı; türler Bu türler Oncorhynchus, Salmo, Salvilinus fontinalis, Hucho hucho, Thymallus thymallus, Esox lucius ve Cyprinus carpio, Serothodon mossambicus; Labeo rohita, Catla catla ve Cirrhinus mrigala.

Spermatozoanın korunmasında aşağıdaki adımlar izlenmelidir:

(1) Milt (semen) toplanması.

(2) Genişletici çözeltinin hazırlanması.

(3) Kriyoprotektan seçimi.

(4) Donma.

(5) Gübrelemede başarı.

Milt Koleksiyonu:

İlk adım sperm toplamaktır. Normal olarak spermler sağlıklı balıklardan sıyırma yöntemi ile toplanır. Sıyırma işlemine daha iyi bir alternatif olan kateter kullanılabilir. En iyi karakteristik özelliklere sahip erkek yavrular seçildi ve Ringers çözeltisi ile yıkandı ve genital papilla bölgesi kurutuldu.

Brooder anestezi veya anestezi olmayabilir. Genel olarak kullanılan anestezi, 0.3 ml / 1 fenoksietanol'dür. Kumar'a (1989) göre, sıyırma işleminden önce suston 250 (organon) enjeksiyonu, Hindistan carps'larında daha iyi sonuç verir. Bu alandaki işçilerin çoğunluğu, süt elde etmek için sıyırma için anestezi uygulanmayan balıkları önerdi.

Süt, şırıngalarda veya hemoliz tüplerinde toplanır ve daha sonra cam ampullerde (kapalı veya kapalı), plastik çubuklarda ve çoğu zaman plastik torbalarda korunur. Spermlerin renk, hacim, yoğunluk, pH ve hareket kabiliyeti fark edilmelidir.

Örnek idrar ve dışkı maddesi içermemelidir. Spermlerdeki anormallikleri görmek için numunenin smear mikroskobu altında incelenmesi gerekir. Numune TAMAM ise, daha sonraki işlemler için koyun, aksi takdirde yeni yavrulardan taze numune alınabilir.

Spermatozoanın toplanması ve korunması sırasında, sabit sıcaklığı korumak için şırınga / ampul / saman havuz suyu içinde tutulabilir. Legendary ve Billard (1980) hemoliz tüplerinde erimiş buzda spermler topladı ve daha sonra 4 ° C'de soğutulmuş bir yüzeyde saklandı.

Sütün toplandığı bir çözelti olan genişleticinin hazırlanması ve seçimi, kriyoprezervasyon için çok önemlidir. Genişletici, sperm enerjisinin tükenmesini önler ve spermi sessiz halde ancak canlı tutar.

İki temel genişletici vardır. Mounibs orta (M) ve Menezo orta (Me) olarak adlandırılırlar. Bu iki ortamda, sığır serun albümini (BSA) ve tellurit yumurta sarısı eklenir. Hint balıkları için, aşağıdaki bileşenlerinde değişiklik yaparak birkaç genişletici denendi.

Ortak bileşenler sodyum klorür, KCI, CaCl2, NaHC03, Na2HP04 ve MgS04'tür. Bunlara ek olarak, kriyoprezervasyonu geliştirmek için besinler ve glisin de eklenir. Gentomisin veya streptomisin gibi antibiyotikler de gerekirse genişletici çözeltiye ilave edilir.

dölveriminin:

Kriyoprotektanın ana işlevi hücreye nüfuz etmektir ve spermatozoanın donma sıcaklığını tolere etmesine yardımcı olabilir. En önemlisi ve yaygın olarak kullanılan DSMO (Dimetil sülfoksit) ve gliserol'dür. Harvey (1983) süt tozu veya yumurta sarısı ile birlikte metanol, DSMO ve gliserol kullandı.

Kriyoprotektan ve genişletici çözeltinin sabit bir oranda, genellikle kriyoprotektanın bir bölümü ve dokuz bölümlük genişletici çözeltisi seyreltici olarak bilinir. Bu seyrelticide, spermler, donma için daha ileri işlemler için toplanır.

Seyreltici (kriyoprotektan + uzatıcı + spermler) polivinil kamışlarına alınır ve kamışların her iki ucu da sızdırmaz hale getirilir ve şimdi donmaya veya soğutmaya hazırdır. Süt soğutulur, sıcaklık 0-5 ° C arasında tutulur. Dondururken, CO2 ve sıvı azot kullanılır. Teleost milinin soğutulmuş depolanması (0-50 ° C) Salmonidlerde yoğun olarak incelenmiştir.

Donma prosedüründe soğuk şok, hücre içi buz oluşumu ve ozmotik şok gibi birçok problem kontrol edilmelidir. Kriyoprezervasyon genel olarak sıvı azotun sıcaklığı olan -196 ° C'de hücre veya doku depolanması anlamına gelir (Şekil 22.1).

Hücre zedelenmesi kontrol edilmelidir. Genel olarak üç tip hücre hasarı ortaya çıkar. Birincisi, donma sıcaklıklarının üzerinde soğutmanın neden olduğu soğuk şoktur. Bu yumurta için daha önemlidir, spermler için çok da önemli değildir.

Bu 0 ° C'ye kadar gerçekleşir. Sıcaklık 0 ° C ile -80 ° C arasındayken ozmotik şok ve yumurtalıkta ve spermde hücre içi buz oluşumu meydana gelir. Başarılı dondurarak saklama için bunlar kontrol edilir.

Kısacası, seyreltici içeren payetler, teneke kutulara aktarılır. Değişken dengeleme periyodu sağladıktan sonra pipetleri tutan kaplar ilk önce sıvı azot buharlarına ve daha sonra -196 ° C sıcaklıkta sıvı azot içerisine daldırılır. Legendra ve Billard (1980), gökkuşağı alabalıklarının spermlerini kuru buzda (katı CO2 -79 ° C) veya 6 aya kadar sıvı azotta depoladı.

Bir dizi taze su türünde, askıya alma spermlerinin kuru buza topak haline getirilmesiyle dondurma işlemi gerçekleştirilmiştir. 0 ° C'den -70 ° C'ye geçiş yaklaşık 2 dakika sürer, bu da 35 ^o C / dak hızında sonuçlanır. Hız - 60 ° C'nin üzerine düştüğü için. En iyi sonuçlar sıvı azotta elde edilir.

çözülme:

Çözülme, ters donma olayıdır. Çözülme, su banyosunda 10 ° C ila 60 ° C arasındaki sıcaklıklarda yapılır. Tüm prosedürün başarısı, spermatozoanın hareketliliğine ve gübreleme kabiliyetine bağlıdır.

Stoss ve Holtz (1982), 1 BMX (3-izobütil-1-metil ksanyum) eklenmiş 120 nm'lik bir NaHC03 çözeltisi ile aktive ederek pembe somon spermatozoanın hareketliliğini 30 sn'den 10 dakikaya çıkarmıştır. Kumar (1989), kriyojenik koşullar altında L. rohita ve H. molitrix'te saklama süresinin yaklaşık 20 gün olduğunu belirtmiştir.

Salmo gairdeneri, Onchorhynchus kisutch ve O.keta'nın yumurtaları, sıyırma işleminden çıkarılarak ve plastik torbalarda coelomic sıvıyla birlikte kapatılarak kapatıldı ve 1 ° C'de oksijen altında tutuldu. Yumurtalar daha sonra bir veya iki yumurta derinliğinde bir tabaka oluşturmak üzere yayılır.

Yumurtalar daha sonra, spermler için daha önce tarif edildiği gibi neredeyse uzatıcı çözelti ve kriyoprotektan ile karıştırılmıştır. Harvey ve Kelley (1984) 'e göre, dondurulmamış (soğutulmuş) ova depolanması, salmonidlerde orta derecede başarılı olmuştur, depolanma zamanları, selülozik sıvıda soğutulmuş yumurtaların soğutulmasıyla elde edilen birkaç hafta boyunca depolanmıştır.