Akış Sitometresinin Klinik Kullanımları
Akış Sitometresinin Klinik Kullanımları!
1. Farklı hücrelerin sayımı (T hücresi ve B hücreleri gibi).
2. B hücre antijenlerinin tespiti ve hematopoetik malignitenin sınıflandırılması (lösemiler ve lenfomalar).
3. Miyeloid hücrelerin yüzeyinde, miyelodisplastik sendromların ve miyeloid löseminin tanısında yararlı olan antijenlerin tespiti.
4. CD34 molekülleri, hematopoetik kök progenitör hücrelerin yüzeyinde eksprese edilir. Kemik iliğinden veya periferik kandan izole edilen kök hücreler CD34'e etiketli mAb'ler kullanılarak numaralandırılarak, kök hücrelerin kesin sayısı hesaplanabilir ve bir hastaya transfekte edilebilir. Kalan kök hücreler sıvı azot içinde depolanır ve gerekirse aynı hastaya daha sonra transfekte edilebilir.
5. HLA fenotiplemesi Her HLA antijeni için mAb etiketli Flor kromu, hücre yüzeyindeki MHC sınıf I ve sınıf II antijenleri ile bağlanmak için kullanılır. Renkli hücreler daha sonra akış sitometresinde analiz edilir (hücreler tek bir sütun olarak geçtikçe).
6. Hücre içi antijenlerin tespiti
Hücreler, ilk olarak, hücreyi tamamen kırmadan hücreyi geçirgen yapan ajanlarla muamele edilir.
↓
Daha sonra, hücreler sitoplazmik proteinleri yerinde çapraz bağlamak ve hücreden sızıntılarını önlemek için hafif koruyucularla işlemden geçirilir.
↓
Daha sonra hücreler, hücre içi antijenlere yönelik etiketli mAb'ler ile muamele edilir. Etiketli mAbler hücrelere girer ve hücre içi antijenlerle bağlanır.
↓
Hücreler, lekeli hücreleri değerlendirmek için akış sitometresinden geçirilir.
ben. Hücre içi terminal deoksinükleotit transferaz (TdT) tespiti, erken B hücre malignitelerinin tanımlanmasına yardımcı olur. TdT, immünoglobulin segmentlerinin birleşme yerlerine rastgele nükleotitlerin eklenmesinden sorumlu olan immünoglobulin geninin yeniden düzenlenmesi sırasında ifade edilen bir enzimdir. Dolayısıyla, TdT'nin malign B hücre popülasyonunda ekspresyonu çok olgunlaşmamış B hücre fenotipini gösterir.
ii. Hücre içi myeloperoksidazın tespiti, miyeloid löseminin çeşitli alt tiplerinin sınıflandırılmasında yardımcı olur.
7. Hücrelerin DNA içeriğinin analizi. Akış sitometresi, bir hücrede genetik materyal miktarını değerlendirebilir ve S-faz fraksiyonunu veya bir hücre popülasyonundaki anöploidi miktarını belirleyebilir, a. DNA ploidi İki kopya kromozom içeren normal hücrelere diploid hücreler denir.
Diploid olmayan tüm hücreler (ovum ve sperm hariç), aneuploid olarak kabul edilir ve güvenilir bir neoplazi göstergesi olarak işlev görebilir. Bir tümördeki çok sayıda hücre, anormal miktarda DNA'ya sahiptir. Akış sitometrik DNA analizi, geçirgenleştirilmiş hücrelerin flüoresan boyalar (propidium iyodür gibi) ile inkübe edilmesi yoluyla gerçekleştirilir.
Boya, DNA ve floresanlarla birleşir. Floresans miktarı, hücrenin DNA içeriği ile doğru orantılıdır. Kemoterapinin bir hastada malignite için etkinliği ploidy analizi ile değerlendirilebilir. Ploidi analizi, bireysel tümör hücrelerinde toplam nükleer DNA miktarını belirler. DNA endeksi, tümör hücresinin DNA floresansının normal hücrenin DNA floresanına oranıdır. Normal diploid hücrenin DNA endeksi 1'dir. 1'den fazla veya daha az DNA endeksi, bir aneuploid tümöre işaret eder.
b. DNA hücre döngüsü analizi:
Hücre çoğalması sırasında çeşitli hücre döngüsü fazlarındaki hücrelerin DNA içeriği (yani, Gq / Gj fazı - DNA sentezi öncesi faz; S fazı-DNA sentezi; G2 / M fazı - DNA sonrası sentez fazı) hücre büyümesini değerlendirmek üzere ölçülebilir ve kanser saldırganlığı. Agresif kanser hücreleri tarafından daha fazla DNA sentezlenir. S fazından geçen hücreler, saldırganlıkları ile doğrudan orantılı olan DNA sentezini gösterir.
8. Akış sitometresiyle birçok lökosit fonksiyonel deneyi yapılabilir.
ben. Kronik granülomatöz hastalık için bir tahlil olarak 02 - (süperoksit) üretimi.
9. Hücre canlılığının tespiti:
Boya propidium iyodür, membranları kırılmış ve bozulmuş bir nükleer yapıya sahip hücrelere girer. Bu nedenle, propidium iyodür ile ölü hücreler floresan olurken, canlı hücreler floresans olmaz. Ayrıca, propidium iyodürün floresansı, spektrumun uzak kırmızı kısmındadır. Bu nedenle, bu yöntem normal mAb boyama ile birleştirilebilir, burada ölü hücreler kırmızı lekelenir ve bu nedenle veri analizinden çıkarılabilir.
10. Apoptoz geçiren hücreleri tespit etmek için akış sitometrik yöntemler de mevcuttur.
