Antijen veya Antikorların İmmünoffüzyonu

Antijen veya Antikorların İmmünoffüzyonu!

İmmünoffüzyon, antijen veya antikorun veya hem antijen hem de antikor moleküllerinin difüzyonla bir destek ortamındaki hareketini ifade eder.

Antijen ve antikor birbirleriyle bağlanır ve çökelti bandı veya çizgisi olarak çıplak gözle görülebilen çözünmez immüno çökelti oluşturur. J. Oudin, agar dolgulu tüplerde tek bir antijen ve antikor difüzyon sistemi tanımladı.

Kısa süre sonra Ouchterlony, slaytlarda katmanlı agarda çift difüzyon tanımladı. Hareket ayrıca doğrusal veya radyal olarak tanımlanır. İmmünoffüzyon yöntemleri serum proteinlerinin kalitatif ve kantitatif analizi için kullanılır. Bununla birlikte, enzime bağlı immüno-emici tahlil (ELISA) ve radyo immüno-tahlil (RIA) gibi daha hassas ve spesifik yöntemler, immünodifüzyon metotlarının neredeyse yerini almıştır.

Tek İmmunodiffüzyon:

Antijen veya antikor ya sabit kalır ve diğer reaktan hareket eder (Oudin Difüzyon tekniği).

Çift immünodiffüzyon:

Hem antijen hem de antikor birbirlerine doğru hareket etmekte serbesttir. (Ouchterlony tekniği).

Erimiş agar, cam slayt üzerine dökülür veya sertleşir ve katılaşmaya bırakılır. Birkaç milimetre mesafedeki iki küçük kuyu delinmiştir. Antijen ve karşılık gelen antikor çözeltileri zıt kuyucuklara bırakılır. Sürgü / petridish daha sonra 18-24 saat nemli bir odada tutulur. Antijen ve antikor agar boyunca hareket eder ve antijen-antikor kompleksi oluşturmak için birleştirir. Antijen-antikor kompleksi bir çökelme çizgisi olarak görülebilir.

İkili difüzyon da karşılaştırmalı amaçlar için antijen ve antikor kuyularının çeşitli açılarda yerleştirilmesiyle gerçekleştirilir. Bu reaksiyonların üç şekli, Şekil 27.2'de gösterilmektedir.

ben. Kimlik tepkisi:

İki oyuktaki antijenler aynıdır (Agl ve Ag2). Dolayısıyla, antikor ile reaksiyon, tam olarak benzer bir çökelti çizgileri ile sonuçlanır. Çökelti çizgileri geçmez, ancak sürekli bir çizgi oluşturur. İki çökelti hattının füzyonu, antikorun, iki antijen üzerinde yaygın olarak bulunan epitoplarla reaksiyona girdiğini gösterir.

ii. Kimliksizliğin tepkisi:

İki eşdeğer olmayan antijen (Agl ve Ag3), antijen oyuklarında bulunurken, antikor kuyusu her iki antijene karşı antikorlara sahiptir. Oluşan iki antijen-antikor çökelti çizgisi birbirinden farklıdır. Dolayısıyla iki çökelti çizgisi birbirini tamamen geçmektedir (kesişmektedir).

iii. Kısmi kimliğin tepkisi:

İki kuyucuğun antijenlerindeki antijenik determinantlar kısmen paylaşılır (Agl ve Agla). Dolayısıyla, antikor hem antijenlerle reaksiyona girer hem de tam bir haç oluşturmayan çizgiler oluşturur. Çökelti hattı sadece bir yönde geçmektedir. Genişletilmiş çökelti çizgisi mahmuz olarak adlandırılır. Mahmuz, antikorun ayrıca antijenlerin birinde bulunmayan ek bir epitopu çöktüğünü gösterir.

İkili immünodifüzyon, antijen veya antikorun yarı kantitatif analizi için de kullanılabilir (Şekil 27.3):

Şekil 27.3:

Antijenin yarı kantitatif analizi için çift immünodifüzyon. Antikor merkezi kuyuya yerleştirilir ve antijen periferik kuyularda farklı konsantrasyonlara yerleştirilir

ben. Antijenin miktar tayini:

Antijen X seri olarak seyreltilir ve içine anti-X antikorunun yerleştirildiği bir merkezi kuyuyu çevreleyen oyuklara yerleştirilir. Antijen ve antikor, çukurlardan yayılır ve birbirleriyle reaksiyona girerek, antijen ve antikor çukurları arasında presipit çizgileri oluşmasına neden olur. Antijen-antikor çökeltisinin miktarı, farklı oyuklardaki azalan antijen miktarı ile azalmaktadır. Dolayısıyla, çökelti çizgilerinin kalınlığı, antijen konsantrasyonları azaldıkça azalır.

ii. Antikor miktar tayini:

Antijenin kantitatifine benzer bir prosedür kullanılır, ancak antijenin ve antikorun pozisyonunun değiştirilmesi dışında. Antijen merkezi kuyuya yerleştirilir ve farklı dilüsyonlardaki antikor dış kuyulara yerleştirilir.

Tek Radyal İmmunodiffüzyon:

Mancini, bu yeni tekniği antijenlerin doğru miktar tayini için tanıttı. Antikor, erimiş agar ile karıştırılır ve bir petri kabına dökülür. Agarın katılaşmasından sonra, kuyucuklar kesilir ve farklı antijen konsantrasyonları ile doldurulur (Şekil 27.4).

Antijen oyuktan yayılır ve antijen-antikor kompleksi çökeltisini 48-72 saat içinde oluşturur. Çökelti, her bir oyuğun çevresinde beyaz bir dairesel çizgi olarak görülür. Dairesel halkanın çapı, antijen konsantrasyonuyla doğrudan orantılıdır (yani, daha fazla antijen konsantrasyonu, çökeltinin çapı daha fazladır).

Standart bir eğri, X ekseni ve çapları Y ekseninde bilinen antijen konsantrasyonları çizilerek bir grafik sayfasında çizilebilir. Konsantrasyonu bilinmeyen test antijeni, standart eğrinin, test antijeni tarafından oluşturulan çökeltinin çapı ile interpolasyonu yoluyla belirlenebilir.

Bu yöntemin duyarlılığı 1-3 µg / ml antijendir. Bu yöntem, IgG, IgM veya IgA konsantrasyonlarını ölçmek için kullanılır (sırasıyla agar anti-IgG, anti-IgM veya anti-IgA antiserumlarına dahil edilerek).