Bir Bakterinin Glikozu Kullanabilme Yeteneğini Bulmak için Metil Kırmızı Testi (Şekil ile)

Metnin kırmızı testi (MR testi) hakkında bilgi edinmek, bakterilerin son ürün olarak stabil bir asit üretimi ile glikozu kullanma kabiliyetini öğrenmek için bu makaleyi okuyun!

Prensip:

Bazı bakteriler glikoz kullanma ve onu son ürün olarak laktik asit, asetik asit veya formik asit gibi stabil bir aside dönüştürme kabiliyetine sahiptir.

Bu bakteriler başlangıçta stabil asidi üretmek için karma asit yolu ile daha da metabolize edilen piruvik aside glikozu metabolize eder.

Üretilen asit tipi, türden türe değişir ve bakterilerde bulunan spesifik enzimatik yolaklara bağlıdır. Bu şekilde üretilen asit, pH'ı 4.5 veya altına düşürür; bu, metil kırmızısının renginde sarıdan kırmızıya bir değişim ile gösterilir.

Metil kırmızısı testinde (MR testi) test bakterileri, glikoz içeren bir et suyu ortamında büyütülür. Bakteriler, stabil bir asit üretimi ile glikoz kullanma kabiliyetine sahipse, et suyu kültürüne eklendiğinde metil kırmızısının rengi sarıdan kırmızıya değişir.

Gerekli malzemeler:

Test tüpleri, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama döngüsü, otoklav, bunsen brülör, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, MR-VP suyu (metil kırmızısı-Voges Proskauer suyu veya glukoz fosfat suyu), metil kırmızısı çözeltisi, izole koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. MR-VP broth besiyerinin (ana bileşen olarak glikoz içeren) veya 100 ml besi için gerekli hazır tozunun içerikleri çalkalanarak 250 ml konik bir şişede 100 ml damıtılmış su içinde tartılır ve çözülür. girdap gibi. MR-VP suyu da glukoz fosfat suyu olarak adlandırılır (Şekil 7.4).

2. pH değeri bir pH kağıdı veya pH ölçer kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak 6.9'a veya daha azsa 0.1N NaOH kullanılarak 6.9'a ayarlanır. Şişe, gerekirse bileşenleri tamamen çözmek için ısıtılır.

3. Et suyu beş adet test tüpüne dağıtılır (her biri yaklaşık 10 ml), pamuk tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlı.

4. Et suyu tüpleri 121 ° C'de (15 psi basınç) 15 dakika otoklavda sterilize edilir.

5. Et suyu tüplerinin oda sıcaklığına soğumasına izin verilir.

6. Test bakterileri, aseptik olarak, tercihen bir laminer akış odasında, bunsen alevinde sterilize edilmiş bir aşılama döngüsünün yardımı ile et suyuna aşılanır. Her aşılamadan sonra döngü sterilize edilir.

7. Aşılanmış et suyu tüpleri, bir inkübatörde 24 ila 48 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edilir.

8. Her test tüpüne alkolik metil kırmızısı (3-4 damla) damlatılır.

Gözlemler:

1. Kırmızı renk üretildi: MR pozitif (yani bakteriler, metil kırmızının sarıdan kırmızı renge dönüştürülmesiyle belirtildiği gibi glikozu stabil bir aside dönüştürdü. Karışık asit fermantasyonunu gösterir).

2. Kırmızı renk üretilmedi: MR negatif (yani ortamdaki glikoz stabil bir aside dönüştürülmedi. Bu, butilen glikol fermantasyonunu gösterir).