Hidrolize Üre Yapma Yeteneklerini Bulmak İçin Bakteriler Üzerinde Üre Testi (Şekilli)

Hidrolize Üre Yapma Yeteneklerini Bulmak İçin Bakteriler Üzerinde Üre Testi (Şekil)!

Prensip:

Bazı bakteriler, üre, NH3 ve CO2'ye hidrolize (su varlığında parçalanma) enzimini 'üreaz' üretebildikleri için gösterirler.

NH3 alkalindir (baziktir), bu nedenle fenol kırmızısının rengini sarıdan pembeye değiştiren pH'ı yükseltir.

Üreaz testinde, test bakterileri üre ve fenol kırmızısı içeren agar çekiklerinde büyütülür. Bakteriler üre hidrolize etme yeteneğine sahipse, ortamın rengi sarıdan pembeye değişir. Bazı bakteriler, ortamdaki peptonları parçalayarak NH3 üretebilir. Bu gibi durumlarda yanlış pozitif sonuç elde edilir.

Gerekli malzemeler:

Test tüpleri, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama iğnesi, otoklav, bunsen burner, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, membran filtrasyon aparatı, üre agarı, izole koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. Beş test tüpü koton tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlanmış (Şekil 7.15).

2. 100 ml ortam için gerekli olan üre agar besiyerinin bileşenleri (ana bileşen olarak üre içeren) veya hazır toz (üre hariç), 250 ml'lik bir konik şişe içinde 90 ml damıtılmış su içinde tartılır ve eritilir. titriyor ve dönüyor.

3. pH değeri, bir pH kağıdı veya pH metre kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak veya daha azsa 0.1N NaOH kullanılarak 6.9'a ayarlanır.

4. Şişe, agarı ortam içinde tamamen çözmek için ısıtılır.

5. Şişe pamuk tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlanmış.

6. Beş test tüpü ve üre agar içeren (üre hariç) konik şişe, bir otoklavda 15 dakika boyunca 121 ° C'de (15 psi basınç) sterilize edilir.

7. Sterilizasyondan sonra, otoklavdan çıkarılır ve ortamın katılaşmasına izin vermeden bir süre soğumaya bırakılır. Ortamın soğutulması, su damlacıklarının yoğunlaşmasını ve birikmesini önler. Ortam, depolama sırasında önceden hazırlanmış ve katılaşmışsa, tamamen eriyene kadar dikkatlice ısıtılarak sıvılaştırılmalıdır.

8.% 20 üre çözeltisi, 20 gram üre, 100 ml damıtılmış su içinde çözülerek hazırlanır ve membran filtrasyon cihazı ile sterilize edilir, çünkü üre, ısıtma üzerine ayrışırken ısıyla sterilize edilemez.

9. 10 ml sterilize edilmiş üre çözeltisi, aseptik olarak 90 ml sterilize edilmiş soğutulmuş sıvılaştırılmış ortam (ısıtma ile sıvılaştırılmış) ile iyice karıştırılır.

10. Katılaşmadan önce, ortam ılık ve erimiş halde, aseptik olarak pamuk tıkalı sterilize edilmiş 5 test tüpüne (her biri yaklaşık 20 ml) dağıtılır.

11. Üre agar çekicilerini elde etmek için besiyerini soğutmak ve katılaştırmak için eğimli bir pozisyonda tutulur.

12. Test bakterileri, aseptik olarak, tercihen bir laminer akış odasında, alın içine bıçaklanarak ve alevle sterilize edilmiş bir iğnenin yardımı ile çekiklerin yüzeyine yapışarak eğiklere aşılanır. İğne her aşılamadan sonra sterilize edilir.

13. Aşılanan slantlar, bir inkübatörde 24 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edilir.