Lenfosit Aktivasyon Testleri Hakkında Faydalı Notlar
Antijenlere veya mitojenlere cevap olarak lenfositlerin fonksiyonel yetenekleri, lenfosit aktivasyon deneyleriyle belirlenir.
Bu nedenle, lenfosit aktivasyon deneyleri, bireyin immüno-kompliyansını değerlendirmek için basit bir lenfosit sayımı yerine daha uygundur.
İki tip lenfosit aktivasyon deneyi vardır:
ben. Lenfosit yüzeyinde 'aktivasyon belirteçlerinin' tespiti.
ii. Lenfositlerin T hücre stimülasyonundan sonra proliferasyon yeteneğinin değerlendirilmesi.
T lenfosit proliferasyonunu değerlendirmek için en yaygın kullanılan T hücresi uyarıcıları:
ben. Dersler [fitohemaglutinin (PHA) ve concanavalin A (ConA gibi)
ii. Süper antijen görevi gören bakteriyel toksinler
iii. Kimyasal bileşikler [örneğin, küresel miristat asetat (PMA), kalsiyum iyonoforlar
iv. Sitokinler
v. mAb'leri yüzey reseptörlerine (özellikle T hücreleri üzerindeki CD3 molekülleri)
B hücresi aktivasyonu aşağıdakiler tarafından uyarılır:
ben. Pokeweed mitojen (PWM). PWM ayrıca T hücrelerini aktive eder
ii. Süper antijenler
iii. lipopolisakaritler
iv. B hücresi yüzeyinde çapraz bağlanan mAb'ler.
a. Saflaştırılmış lenfositler, 96 oyuklu mikro titre oyuklarında kültürlenir ve antijen veya mitojen ile uyarılır (genellikle 48 saat boyunca).
↓
Üçlü timidin (3H-Tdr) oyuklara eklendi ve inkübe edildi
↓
Kuyuların içerikleri filtrelerden emilir ve filtre edilir ve filtre kağıdındaki 3H Tdr miktarı ölçülür. 3 H-Tdr'nin kromozomal DNA'ya dahil edilmesi, hücre çoğalmasını yansıtır.
b. Hücre çoğalmasını belirlemek için radyoaktif olmayan deneyler vardır. Bu tahliller, DNA ya da MTT gibi oksidatif solunumları ölçen boyaları içeren floresan boyaları kullanır.
c. Bromodeoksiüridin (BrdU), yüksek oranda kopyalayan hücrelerin DNA'sına dahil edilir ve bu nedenle hücre çoğalmasını değerlendirmek için kullanılabilir. Hücrelere dahil edilen BrdU, BrdU'ya karşı mAb'ler ve akış sitometrisi (akış hücre sitometrisi ile hücre içi antijenlerin algılanması gibi) kullanılarak tespit edilir.
BrdU ayrıca kanser hastalarına in vivo olarak uygulanabilir ve daha sonra tümör rezeke edilebilir ve tümör hücreleri BrdU'nun dahil edilmesi için değerlendirilebilir. Bu tahlil, bir hastada tümör hücrelerinin proliferatif fraksiyonu hakkında bir fikir sağlar.
d. Sitotoksik T hücresi aktivasyonu, 51 krom bırakma deneyi ile deneye tabi tutulur:
Hedef hücreler, hedef hücrelerin hücre içi proteinlerine bağlanan radyoaktif krom ( 51 Cr) ile etiketlenir.
↓
Etiketli hedef hücreler, sitotoksik T hücreleri ile inkübe edilir.
↓
Sitolitik T hücrelerinin hedef hücre parçalaması, 51 Cr'nin salınması ile sonuçlanır.
Hücreler santrifüjlenir ve süpernatanda salınan 51 Cr ölçülür. Salınan 51 Cr miktarı, hücrelerin lizisiyle orantılıdır.
