Tümör Antijenlerini Tespit Etmede İmmünohistokimyasal Test Teknikleri
İmmünohistokimyasal analizler, tümör antijenlerini tespit etmek ve cerrahi patoloji bölümlerinde lenfosit hücre tiplerini sınıflandırmak için yaygın olarak kullanılır.
Doku örneği bir cam slayt üzerine sabitlenir.
↓
MAb (konjugat) etiketli enzim numune üzerine katlanır ve inkübe edilir.
ben. Eğer örnek mAb'ye karşı spesifik bir antijene sahipse, konjugat örnek üzerindeki antijene bağlanır.
↓
Yıkandıktan sonra substrat eklenir ve inkübe edilir.
ben. Rengin gelişimi, mAb'ye karşı spesifik antijenin doku bölümünde bulunduğunu belirtir.
ii. Spesifik antijenin yokluğunda, renk gelişimi yoktur.
↓
Slayt yıkanır ve doku varlığı, renk varlığı için mikroskopta görülür.
Yaban turpu peroksidazı (HRP), immünohistokimyasal tekniklerde yaygın olarak kullanılan enzimdir. HRP'nin substratı hidrojen peroksit ve diamino-benzidindir. HRP'nin diaminobenzidin ile reaksiyonu siyah renk verir.
Peroksidaz - antiperoksidaz (PAP), cerrahi patolojide enzimleri ve tümörle ilgili antijenleri saptamak için kullanılan başka bir yöntemdir.
Bu üç aşamalı bir yöntemdir:
Aşama 1:
Belirli bir antijene sahip olduğundan şüphelenilen doku bir cam slayta sabitlenir.
↓
Söz konusu antijene karşı bilinen tavşan antikoru, bir cam slayta sabitlenmiş dokuya (antijenin sahip olduğundan şüphelenilen) düşmektedir.
ben. Karşılık gelen antijenin dokuda olması durumunda, antikor ona bağlanır. Slayt inkübasyondan sonra yıkanır.
↓
Adım 2:
Anti-tavşan immünoglobülini (link antikor olarak adlandırılır) slayt üzerine bırakılır.
ben. İlk tavşan antikoru slaytta yer alırsa (antijene bağlı), anti-tavşan immünoglobülini, tavşan antikoruna bağlanır. İnkübasyondan sonra slayt yıkanır.
↓
3. Adımlar:
Peroksidaz ile birlikte peroksidaz için tavşan antikorlarından oluşan bir immün kompleksi bırakılır. Bu tavşan antikoru, anti-tavşan immünoglobine (link antikor-adım 2), Fc bölgesi yoluyla bağlanacaktır. İnkübasyondan sonra slayt yıkanır.
↓
Son olarak, peroksidaz substratı eklenir. Substrat, mikroskopta görülen renkli bir ürünün oluşmasıyla sonuçlanan peroksidaz ile reaksiyona girecektir.
ben. Renkli ürünün doku üzerinde bulunması, karşılık gelen antijenin varlığını gösterir.
ii. Renkli ürünün slaytta yokluğu, söz konusu antijenin dokuda bulunmadığını gösterir.
