2 Antijen ve Antikor İçin Elektroimmunodiffüzyon Teknikleri

İmmünodifüzyon tekniklerinde, antijen ve antikorun bir çökelti hattı oluşturmak için dağılması beklenir ve bu daha uzun zaman alır (24-72 saat).

Antijenin ve / veya antikorun hareketi daha hızlı yapılırsa, çökelti çizgisi çok kısa sürede oluşacak ve böylece teşhis hızlı bir şekilde konulabilecektir. Bu amaç, antijen ve antikorun elektriksel olarak hareket ettirilmesiyle elde edilir. Bu ilkenin birçok varyasyonu var. Kullanılan iki yaygın yöntem karşı akım immünoelektroforez ve Laurell'in roket elektroforezidir.

Karşı Akım İmmünoelektroforezi (Tek Boyutlu Çift Elektroimmunodiffüzyon):

Agar içinde bir slayt üzerinde iki kuyu kesilir.

↓

Bir oyuk antijen ile doldurulur, diğer oyuk ise antikor ile doldurulur.

↓

Agarın antikor tarafı anoda bağlanır ve antijen tarafı elektroforez aparatının katoduna bağlanır.

↓

Elektriğin uygulanması üzerine, antijen ve antikor molekülleri (elektrik yükleri nedeniyle) agarda elektriksel etki altında hareket eder.

Bir alkalin tamponda, klinik olarak önemli antijenlerin çoğu elektronegatiftir ve bu nedenle anoda doğru hareket eder (yani, antikora doğru). Antikor molekülleri elektriksel olarak nötr veya zayıf negatiftir. Normal olarak elektriksel olarak negatif antikor moleküllerinin anoda doğru hareket etmesi gerekir.

Ancak elektroforez sırasında agardaki hidroniyon iyonlarının hareketi çok güçlüdür ve zayıf negatif antikor moleküllerini katoda doğru (yani, antijen kuyusuna doğru) çeker. Antijen ve antikor molekülleri zıt yönlerde hareket ettiklerinden birbirleriyle buluşurlar ve iki kuyu arasında bir çökelti çizgisi oluştururlar. Çökelti çizgisi 30 dakikada görülebilir (difüzyonda 24 saatin aksine) ve difüzyondan yaklaşık 10 kat daha hassastır.

Karşı akım immünoelektroforezi tespit etmek için kullanılır

a. Beyin omurilik sıvısında Meningococcal, cryptococal ve hemofilik antijenler ve

b. Serumda Hepatit B yüzey antijeni.

Lauren'in Roket Elektroforezi (Tek Boyutlu Tek Elektroimmunodiffüzyon):

Bu teknik antijenleri ölçmek için kullanılır. Antikor, erimiş agar ile karıştırılır ve cam slayt üzerine dökülür. Katılaşmadan sonra, kuyucuklar kesilir ve farklı antijen konsantrasyonları ile doldurulur.

↓

Elektrik uygulandığında, antijen agar içeren antikorlara sürülür. Precipitin çizgileri, antijenin hareketli sınırının yan kenarları boyunca oluşturulur. Yavaş yavaş, antijen çökeltme ile kaybolur, böylece ön kenardaki konsantrasyonu azalır ve yan kenarlar keskin bir nokta oluşturmak üzere birleşir. Bu nedenle, ortaya çıkan çökelme şekli bir ani veya roketi andırır.

Çivinin antijen kuyusundan mesafesi antijen konsantrasyonundaki artışla artar. Bilinen antijen konsantrasyonları kullanılarak standart bir eğri oluşturulabilir. Bir test antijeninin konsantrasyonu, standart roketin oluşturduğu roket mesafesiyle interpolasyonu yoluyla belirlenebilir.

Bu tekniğin duyarlılığı yaklaşık olarak 0.5 mg / ml'dir. Laurell tekniği ayrıca serebrospinal sıvıda (BOS) kriptokok, meningokok ve hemofilus antijenlerini saptamak için kullanılır.