3 Aglütinasyon Tekniklerinin Sınıflandırılması
Hücrelerin aglütinasyon tekniklerinin sınıflandırıldığı üç tip: 1. direkt aglütinasyon, 2. dolaylı (pasif) aglütinasyon ve 3. ters (pasif) aglütinasyon.
1. Doğrudan Aglütinasyon Testi:
Hücreler (bakteri, mantar ve eritrositler gibi) ve çözünmeyen partiküllü antijenler, kendi spesifik antikorları ile doğrudan aglütine edilebilir. Antikor iki hücrede antijenlere bağlanabileceği iki Fab koluna sahiptir. Benzer şekilde birçok antikor molekülü, bir kafes oluşturmak için bir dizi hücreye bağlanır.
Bu kafes formasyonu görsel olarak kümeler halinde görülür. Dolayısıyla, kümelerin oluşumu, antijen-antikor bağlanmasının varlığını gösterir. Aglütinasyon eksikliği, antijen-antikor reaksiyonunun olmadığını gösterir.
Doğrudan Aglütinasyon Testinin Kullanımı:
a. Mikropların tanımlanması:
Kültür ortamında yetiştirilen bakteriyel koloniler, mikroplara karşı bilinen antiserumlar kullanılarak tanımlanır. Görünür bir aglütinasyon üreten antimikrobiyal antiserum bakterileri tanımlar.
b. Serumda mikroplara karşı antikor varlığını tespit ederek mikrobiyal enfeksiyonların teşhisi. Bilinen mikrobiyal antijenler, hastanın serumuyla karıştırılır ve aglütinasyonun meydana gelmesi, mikroplara karşı serum antikorlarının varlığını gösterir.
c. ABO insan eritrositlerinin kan gruplaması (antiserumlar kullanarak).
Aglütinasyon testleri, lam üzerinde (lam aglütinasyon testi) veya tüplerde (tüp aglütinasyon testi) yapılır.
ben. Kızak aglütinasyon testi basit ve kolaydır ve testi gerçekleştirmek için birkaç dakika gerekir.
ii. Tüp aglütinasyon testi, serumun seri olarak seyreltilmesi ve ardından seyreltilmiş serumların sabit miktarda mikrobiyal antijen ile karıştırılması yoluyla mikrop karşıtı serum antikorlarının miktarını ölçmek için kullanılır. Uygun inkübasyondan sonra serumun görünür şekilde aglütinasyonunu gösteren en yüksek dilüsyonu, serumun titresi olarak alınır (Örneğin, Widal tüp testi, Brucella tüp testi). Titre, serumdaki antikor konsantrasyonunu yansıtır; titre ne kadar yüksek olursa, antikorların konsantrasyonu o kadar fazla olur.
Bulaşıcı ajanlara karşı serum antikorlarını saptamak için kullanılan slayt testleri, ilk tarama testleri olarak kullanılır. Slayt testi sonuçlarını doğrulamak için pozitif slayt testlerinin serumları tüp testleri ile tekrar test edilmelidir. Kayma testi, özellikle çok yüksek serum antikor seviyelerinde (örneğin, brusella antikorlarına sahip prozon fenomeni) yanıltıcı sonuçlar verebilir.
Aglütinasyon test sistemlerinde çok fazla iç değişkenlik vardır. Bu nedenle, bir hastanın serum titre değerleri iki kez kontrol edildiğinde, titre değerleri arasındaki fark, sadece titre değerleri en az iki çift dilüsyon [veya iki tüp ile fark (ilk değerin dört katı) arasındaki fark olduğunda önemlidir. ] (örn. Widal tüp testinde, serum iki kat seyreltilir: 20'de 1, 80'de 1, 80'de 1, 160'da 1, 320'da 1 ve 640'da 1. Hastada ilk Widal testi varsa 160 1'de titre, ikinci Widal test titresi 640'ta 1 veya 640'ta 1'den fazla ise önemlidir.)
Heterofil antikor testi:
(Genellikle mono-spot testi olarak adlandırılır) Heterofil antikor testi, enfeksiyöz mononükleoz hastalığına neden olan Epstein Barr (EB) virüsüne karşı antikorların saptanması için bir hemaglütinasyon testidir. Enfeksiyöz mononükleoz çaprazlama sırasında oluşan IgM antikorları, at RBC yüzey antijenleriyle reaksiyona girer (muhtemelen EB virüsü ve at RBC yüzey proteinleri arasındaki antijenik benzerlik nedeniyle) ve hemaglutinasyona neden olur.
Dolaylı (Pasif) Aglütinasyon Testi:
Dolaylı aglütinasyon testinde, bilinen çözünür antijenler, diğer hücrelere (örneğin koyun veya hindi eritrositler) veya antijenlerin pasif taşıyıcıları olarak hareket eden etkisiz parçacıklara (örneğin, lateks, bentonit, kömür, polistiren) kaplanır.
Birçok antijen eritrositlerin üzerine doğrudan veya eritrositlerin formalin, tannik asit veya glutaraldelyde ile işlemden geçirilmesinden sonra kaplanabilir. Kaplama için eritrosit kullanmanın avantajları, kolay bulunabilirlikleri ve depolama kapasiteleridir. Üstelik bu testler oldukça hassastır.
Test serumu bilinen antijen kaplı eritrositler veya lateks ile karıştırılır.
↓
Test serumunun antikorları varsa, eritrositler veya lateks partikülleri aglütine olur ve görünür kümeler oluşturur.
Hemaglütinasyon testi:
Hemaglutinasyon testleri basit ve gerçekleştirmesi kolaydır. Hem nitel hem de nicel testler hemaglütinasyon tekniği ile yapılabilir.
Test serumu bir mikrotitre plakası oyuğundaki bir seyreltici çözeltisinde seri olarak seyreltilir.
↓
Bilinen bir antijen ile kaplanmış RBC'ler, tüm oyuklara eşit hacimlerde ilave edilir. Uygun pozitif kontrol, negatif kontrol ve reaktif kontrolleri kullanılır. Plaka iyice çalkalanır ve titreşimsiz bir yerde inkübe edilir.
↓
İnkübasyondan sonra, plaka aglütinasyon için çıplak gözlerle okunur.
Olumlu tepki:
Aglütinasyona sahip hazneler, antijen kaplı RBC'lerin test serumundaki karşılık gelen antikorlarla bağlanmasını belirtir. Aglütine edilmiş kuyucuğun alt kısmının halı görünümüne sahip olduğu açıklanmaktadır.
Olumsuz tepki:
Antijen-antikor bağlanmasının olmadığı çukurlarda, RBC'lerin aglütinasyonu gerçekleşmez. Yerçekimi nedeniyle, RBC'ler kuyucukların dibine çöker ve “düğme” nin kenarının keskin ve düzenli olduğu “düğme” benzeri bir görünüm verir.
Test serumunun antikor titresi:
Tamamen (yüzde 100) aglütinasyon gösteren kuyucuğa göre yüzde 50 aglütinasyon veren serum dilüsyonu, test serumunun antikor titresidir. Hemaglütinasyon kitleri, Hepatit B virüsüne, HIV, tiroglobülin ve benzeri maddelere karşı antikor tespiti için mevcuttur.
Jelatin parçacık aglütinasyon:
Jelatin partikülleri, partikül aglütinasyon testleri için eritrositlere alternatiftir. Özel jelatin partikülleri (yaklaşık 3 µm çap) oldukça hidrofilik bir yüzeye sahiptir ve bu nedenle numunede spesifik olmayan materyallerin bağlanması yoktur. Jelatin parçacıkları, faz ayrımı ve 40 ° C'de üç boyutlu çapraz bağlama ile yapılır. Elde edilen parçacıklar formaldehit veya gluteraldehit ile sabitlenir.
Jelatin parçacıkları antijenikliğe sahip değildir ve bu nedenle hemaglütinasyon analizleri ile ilgili problemlerden aridirler (örneğin, spesifik olarak RBC'lerle reaksiyona girmeyen ve hemaglutinasyon analizlerinde yanlış pozitif aglütinasyonlar veren heterofil antikorlar gibi).
Lateks aglütinasyon testi:
Eritrositler ve jelatinin yanı sıra, yüzeylerinde antijenleri taşımak için birkaç başka parçacık da kullanılabilir. Bu antijen kaplı partiküller, spesifik antikorlarla karıştırıldığında aglütinat olur. Protein ve polisakarit antijenleri lateks parçacıkları üzerine kaplanabilir. Bu antijen kaplı partiküller, antikor varlığında aglütine olur.
Ters pasif hemaglütinasyon testi:
Ters pasif hemaglutinasyon analizlerinde RBC'ler bilinen antikorlarla kaplanır. Bu kitler, serumdaki HB s Ag gibi test numunelerindeki antijenleri saptamak için kullanılır.
Gül-Waaller Testi:
Bu romatoid faktörü saptamak için pasif bir hemaglütinasyon testidir. İnsan romatoid faktörünün özelliklerinden biri, insan IgG'sinin yanı sıra tavşan IgG'sine bağlanabilmesidir. Koyun eritrositleri, alt kümeleştirme miktarlarında anti-koyun IgG antikorları (tavşanlarda büyütülmüş) ile kaplanır. Romatoid faktörler, tavşan anti-koyun IgG'si ile kaplanmış koyun eritrositlerini aglütine eder.
Flokülasyon Testi:
Flokülasyon, antikorları saptamak ve nicelleştirmek için kullanılan başka bir antijen-antikor kompleksi oluşum deneyi türüdür. Aglütinasyon ve çökeltinin aksine (burada antijen-antikor kompleksleri tüpün dibine çöker), flokülasyon testinde antijen-antikor kompleksleri topaklanır ve topaklar halinde süspansiyon halinde kalır ve sonuçlar bir mikroskop altında okunur. Bu teknik, sifilise neden olan bakteriler olan Treponema pallidum'a karşı antikorları tespit etmek için VDRL testinde (zührevi hastalık araştırma laboratuvarı testi) kullanılır.
Viral Hemaglütinasyon:
Viral hemaglutinasyon, antijen-antikor reaksiyonu içermeyen özel bir eritrosit aglütinasyon kategorisidir. Bazı virüsler, RBC'lerin yüzey proteinlerine bağlanır ve bu bağlanma, RBC'lerin kendiliğinden aglütinasyonuna yol açar.
RBC'lerin bir virüs tarafından spontan birikmesi, spesifik anti-viral antikorlarla önlenebilir. Virüse karşı antikorlar, viral yüzey antijenlerine bağlanır ve virüs ile RBC'lerin etkileşimini önler ve sonuç olarak, RBC'ler aglütine değildir. Viral hemaglütinasyon inhibisyonu denemesi olarak adlandırılır ve hastaların serumundaki viral antikorları ölçmek için kullanılır.
Soğuk aglütinin testi:
Belirli enfeksiyonlar (özellikle Mycoplasma pneumoniae) ve otoimmün hastalıklar sırasında oluşan antikorlar, RBC'leri 4 ° C'de aglütine etme özelliğine sahiptir. Bu antikorlara soğuk aglütininler denir.
Hastanın serumunun seri seyreltileri gece boyunca 4 ° C'de yüzde 1 RBC ile inkübe edildi.
↓
Tüpler, aglütinasyonun varlığı açısından incelenmiştir. Eğer aglütinasyon mevcutsa, tüpler 37 ° C'de tekrar inkübe edilir.
↓
RBC'lerin 37 ° C'de yeniden toplanması, serumun soğuk aglütininlere sahip olduğunu gösterir. Soğuk aglütinin tahlili, Mycoplasma pneumoniae enfeksiyonunu teşhis etmek için kullanılır. Akut Mycoplasma pneumoniae ile enfekte olmuş hastaların yüzde 50 ila 80'i IgM tipine ait soğuk aglütininlidir.
