Hidrojen Üretme Yeteneklerini Bulmak İçin Bakteriler Üzerinde Hidrojen Sağlanan Test (Şekilli)

Hidrojen üretme yeteneklerini bulmak için bakteriler üzerinde verilen hidrojen testi hakkında bilgi edinmek için bu makaleyi okuyun!

Prensip:

Bazı bakteriler sülfürü hidrojen sülfürüne indirgeyebilir. Demir sülfitin siyah çökeltilerini üretmek için demir (demir tuzları) ile reaksiyona giren renksiz bir gazdır.

Ayrıca, siyah kurşun sülfit çökeltileri oluşturmak için kurşun asetat ile reaksiyona girer. Hidrojen sülfit testi (H, S testi) kükürt kaynağına bağlı olarak iki şekilde yapılabilir.

Bunlar aşağıdaki gibidir:

(ben) İnorganik kükürt kaynağı kullanılarak H2S testi

(İi) Organik kükürt kaynağı kullanarak H ₂ S testi

(i) İnorganik Sülfür Kaynağı Kullanılarak H ₂ S Testi:

Bu testte, test bakterileri, glukoz, sukroz, laktoz, fenol kırmızısı, sodyum tiyosülfat ve demir sülfat içeren üçlü şekerli demir agar slantlarında (TSI agar slantları) büyütülür. Bakteriler besiyerinde kullanılan inorganik kükürt (sodyum tiyosülfat) kullanıyorsa, ortamdaki demir sülfat ile birleşerek H2'nin üretilmesi, kıtanın renginin siyaha dönüşmesiyle sonuçlanan demir sülfitin siyah çökeltilerini oluşturur. .

İnorganik kükürt kullanımının yanı sıra, eğer bakteri üç şekerden (glikoz, sukroz veya laktoz) herhangi birini kullanabilirse, ortamın pH'ını düşüren asit üretilir. Sonuç olarak, eğimin rengi kırmızıdan sarıya değişir.

Gerekli malzemeler:

Test tüpleri, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama iğnesi, otoklav, bunsen brülör, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, üçlü şeker demir ağar (TSI agar) izole kolonileri veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. TSI agar besiyerinin içerikleri (ana bileşenleri olarak 3 şekeri ve demiri içeren) veya 100 ml besiyeri için gereken hazır tozu tartılarak 100 ml damıtılmış su içinde 250 ml'lik bir konik şişe içinde tartılır ve eritilir. Çalkalama ve döndürme (Şekil 7.13).

2. pH değeri, bir pH kağıdı veya pH ölçer kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak veya daha azsa 0.1N NaOH kullanılarak 7.4'e ayarlanır.

3. Şişe, agarı ortam içinde tamamen çözmek için ısıtılır.

4. Katılaşmadan önce, sıcak erimiş haldeki ortam 5 test tüpüne (her biri yaklaşık 20 mi) dağıtılır.

5. Test tüpleri koton tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlanmış.

6. Bir otoklavda 121 ° C'de (15 psi basınç) 15 dakika sterilize edilirler.

7. Sterilizasyon sonrasında, otoklavdan çıkarılır ve ortamın soğutulması ve katılaştırılması için TSI agar slantlarının elde edilmesi için meyilli bir pozisyonda tutulur.

8. Test bakterileri, aseptik olarak, tercihen laminer bir akış odasında, alın içine bıçaklanarak ve alevle sterilize edilmiş bir iğne yardımı ile çekiklerin yüzeyinde çizik yapılarak eğiklere aşılanır. İğne her aşılamadan sonra sterilize edilir.

9. Aşılanan slantlar, bir inkübatörde 24 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edilir.

Gözlemler:

1. Popo rengi siyah olarak değişir: H ₂ S pozitif.

2. Popo rengi siyah olarak değişmez: H ₂ S negatif.

(ii) Organik Sülfür Kaynağı Kullanılarak H ₂ S Testi

Bu testte, test bakterileri organik kükürt kaynağı olarak sistein içeren sistein broth içinde büyütülür. Bakteriler besiyerinde kullanılan organik kükürt (sistein) 'sistein desülfüraz' enzimi yardımıyla kullanırsa, H2S üretilir. Bu H2S, kağıt şeridin renginde siyaha dönüşen siyah kurşun sülfit çökeltileri oluşturmak için bir kağıda batırılmış kurşun asetat ile birleşir.

Gerekli malzemeler:

Test tüpleri, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama döngüsü, otoklav, bunsen brülör, laminer akış haznesi, atma kavanoz, kuluçka makinesi, sistein suyu, Whatman filtre kağıdı şeritleri, kurşun asetat çözeltisi (doymuş), izole koloniler veya saf bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. Sistein broth besiyeri (ana bileşen olarak sisteini içeren) veya 100 ml besi için gerekli hazır tozunun içerikleri çalkalanarak ve döndürülerek 250 ml'lik bir konik şişede 100 ml damıtılmış su içinde tartılır ve eritilir ( Şekil 7.14).

2. pH değeri bir pH kağıdı veya pH ölçer kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak 7.5 veya daha düşükse 0.1N NaOH kullanılarak 7.5'e ayarlanır. Şişe, gerekirse bileşenleri tamamen çözmek için ısıtılır.

3. Et suyu beş adet test tüpüne dağıtılır (her biri yaklaşık 10 ml), pamuk tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlı.

4. Et suyu tüpleri 121 ° C'de (15 psi basınç) 15 dakika otoklavda sterilize edilir.

5. Et suyu tüplerinin oda sıcaklığına soğumasına izin verilir.

6. Test bakterileri, aseptik olarak, tercihen bir laminer akış odasında, bunsen alevinde sterilize edilmiş bir aşılama döngüsünün yardımı ile et suyuna aşılanır. Her aşılamadan sonra döngü sterilize edilir.

7. Kurşun asetat çözeltisine batırılmış küçük bir kağıt şeridi (doymuş), her bir test tüpünün ağzına, uzun bir kısmı test tüpünün içinde kalacak ve küçük bir kısmı dışarıda kalacak şekilde sabitlenmiştir.

8. Aşılanmış çorba tüpleri, bir inkübatörde 48 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edilir.