Fenilalanin Deaminize Amino Asit Deaminate Yeteneklerini Bulmak İçin Bakteriler Üzerinde Test (Şekil)

Fenilalanin deaminize testi hakkında bilgi edinmek için bakteri üzerindeki Amino Asitin deamine olma yeteneklerini öğrenmek için bu makaleyi okuyun!

Prensip:

Bazı bakteriler 'fenilalanin deaminaz' enzimini üretebildikleri için amino asit fenilalanini deamine etme kabiliyetine sahiptir.

Bu enzim, amino grubunu çıkartarak fenilalanini deaminleştirir, böylece fenilpirvik asit (bir keto asit) ve amonyak (NH3) üretir. Fenilpirvik asit, ferrik klorür çözeltisi ile yeşil renk oluşturur.

Fenilalanin deaminaz testinde, test bakterisi fenilalanin içeren agar slantlarında büyütülür. Bakteriler fenilalanini ayırt etme kabiliyetine sahipse, ferrik klorür çözeltisinin üzerine bırakılması üzerine meyvelerin rengi sarıdan yeşile değişir.

Gerekli malzemeler:

Test tüpleri, konik şişesi, pamuk tıkaçları, aşılama döngüsü, otoklav, bunsen brülör, laminer akış odası, atma kavanoz, kuluçka makinesi, fenilalanin agar, ferrik klorür çözeltisi (% 10), izole edilmiş koloniler veya bakteri kültürleri.

Prosedür:

1. Fenilalanin agar besiyerinin bileşenleri (ana bileşenler olarak fenilalanin içeren) veya 100 ml ortam için gereken hazır tozu tartılır ve çalkalanarak ve döndürülerek 250 ml'lik bir konik şişede 100 ml damıtılmış su içinde çözülür ( Şekil 7.17).

2. pH değeri bir pH kağıdı veya pH ölçer kullanılarak belirlenir ve daha fazla ise 0.1N HCI kullanılarak 7.2'ye veya daha az ise 0.1 N NaOH kullanılarak 7.2'ye ayarlanır.

3. Şişe, agarı ortam içinde tamamen çözmek için ısıtılır.

4. Katılaşmadan önce, sıcak erimiş haldeki ortam 5 test tüpüne (her biri yaklaşık 20 mi) dağıtılır.

5. Test tüpleri koton tıkalı, kraft kağıtla kaplı ve iplik veya lastik bant ile bağlanmış.

6. Bir otoklavda 121 ° C'de (15 psi basınç) 15 dakika sterilize edilirler.

7. Sterilizasyondan sonra, otoklavdan çıkarılır ve fenilalanin agar slantlarını elde etmek için besiyerini soğutmak ve katılaştırmak için eğimli bir pozisyonda tutulur.

8. Test bakterileri, alevle sterilize edilmiş bir ilmek yardımıyla eğik yüzeylerin üzerine çizilerek aseptik olarak, tercihen laminer bir akış odasında aşılanır. Her aşılamadan sonra döngü sterilize edilir.

9. Aşılanan slantlar bir inkübatörde 24 ila 48 saat 37 ° C'de inkübe edilir.

10. Her eğime 4-5 damla demir klorür çözeltisi (% 10) eklenir.